肠胃舒胶囊等6种中成药微生物汇总.ppt

肠胃舒胶囊等6种中成药微生物限度检查法验证实验总结 一．目的 香港仁奇诊所：受你诊所的委托，我所抗生素室对肠胃舒胶囊等6种中成药微生物限度检测，并对其进行方法学验证，归纳总结如下： 二．样品 骨络通酒011362北京北卫药业有限公司、化瘤胶囊302107北京北卫药业有限公司、肾宁丸21006北京北卫药业有限公司、消渴丸0201060北京北卫药业有限公司、肠胃舒胶囊030610北京北卫药业有限公司、防癌胶囊100210北京北卫药业有限公司． 三．菌种 枯草杆菌63501、金黄色葡萄球菌26003、大肠杆菌44102、白色念珠菌98001、黑曲霉98003、沙门氏菌50094。 四．方法 中国药典2000版与2005版微生物限度检查法方法验证的比较实验。 五．方法验证： （一）．菌液制备 1．取经37℃培养18-24小时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌肉汤培养物1ml+9ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-7为50~100个/ml，做活菌计数备用。 2．取经25 ℃培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9 ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-7为50~100个/ml，做活菌计数备用。 3．取经25 ℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3~5ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用标准比浊管比浊，与浊度相当后，取1 ml +9 ml盐水=10-1，逐管10倍稀释为10- 4约50~100个/ ml，做活菌计数备用。 （二）．供试液制备 称取各品种样品10 g，加0.1%胨水氯化钠稀释液100 ml浓度均为1：10供试液，分别人工污染上述5种试验菌株。 （三）．培养基稀释法 采用加0.5 ml、0.2 ml、0.1 ml /皿供试液，再加15~20 ml琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~48小时观察结果，细菌计数，测定回收率。 （四）．离心集菌薄膜过滤法 分别取不同品种的1：10供试液10 ml，移至灭菌的离心管中，以500转/分5分种后，取上清液1 ml，加入薄膜过滤器中，采用0.1%蛋白胨氯化钠冲洗液300ml/膜，再加规定菌株冲洗后，取膜贴于琼脂平板，置规定温度培养24~72小时观察结果 （五）．回收率测定： 1) 试验组 分别取不同品种的1：10供试液1 ml、50~100个/ ml 试验菌株，同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时观察结果。薄膜过滤法以最后一次的冲洗液加入试验菌。 2) 活菌组 测定每一菌株加的试验菌数 3) 供试液对照 测定供试品本底菌数 4) 稀释剂对照组 四．结果见表1.2.3. 药物名称 人工染菌回收率% 控制菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 大肠菌群 ? 1g 0.1g ? 化瘤胶囊 96.0 100.0 100.0 100.0 100.0 ⊕ ⊕ ? 肾宁丸 100.0 100.0 75.6 100.0 95.5 ⊕ ⊕ ? 防癌胶囊 35.4 100.0 66.6 100.0 81.2 ⊕ ⊕ ? 肠胃舒胶囊 100.0 21.7 46.6 100.0 100.0 ⊕ ⊕ ? 骨络通酒 100.0 6.8 61.1 100.0 91.6 ⊕ ⊕ ? 消渴丸 93.4 1.1 66.6 100.0 87.5 ⊕ ⊕ ? 表1结果可见 1.采用常规方法检验６个品种，人工污染5株代表菌株，其中化瘤胶囊、肾宁丸，２个品种供试品的回收率均高于70%，经方法学验证，无抗菌活性，可采用常规方法检验。 2．有3个品种对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌有不同程度的抗菌活性，肠胃舒胶囊、骨络通酒、消渴丸3个品种供试品回收率为1~66.6%，有明显的抗菌活性。此外防癌胶囊对大肠杆菌的回收率为 35.4%低于70%，有抗菌作用，不可采用常规方法，可采用适宜方法进行检验 3．采用培养基稀释法 测定上述含抑菌成份的中成药微生物限度验证试验，结果见表2.3。 药品名称 人工染菌回收率% 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草杆菌 骨络通酒 * 75.8 100.0 消渴丸 * 79.0 76.0 肠胃舒胶囊 * 21.2 ? 防癌胶囊 65.9 * 86.4 其回收率显示，骨络通酒、消渴丸稀释0.5ml/皿对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌回收率均超过70%，可用此法测定。防癌胶囊对枯草杆菌回收率超过70%，而对大肠杆菌回收率低于70%，稀释至0.2ml/皿对大肠杆菌回收率超过70%，可采用稀释法0.2ml/皿测定。胃肠舒胶囊对枯草杆菌采用稀释法0.2m