综合试验.DOC

综合试验 柑橘中有效成分（药物、天然色素）和微量金属元素的提取、分离及其含量与结构的测定 俞莹 2002.1.3－4 实验合作者 王晶晶 【实验目的】 了解生物样品中有效成分的提取方法。 了解针对不同的分析目的，采用不同的分析手段与样品处理方法。 了解和初步掌握色质联用（GC－MS）、电化学方法（微分脉冲伏安法）、高压液相色谱（HPLC）、原子吸收光谱法（AAS）等高灵敏度、高选择性的仪器分析方法。 【实验内容】 新鲜橘皮的样品处理 将柑橘外皮洗净、切成碎块备用。 榨出橘汁倒入具塞磨口锥形瓶中，离心。 原子吸收光谱法测定橘汁及橘皮中的微量元素 仪器及试剂 台式天平，电动摇床，高速离心机，火焰原子吸收分光光度计，比色管，刻度吸量管，钙标准溶液，镧溶液，盐酸溶液，去离子水。 标准工作曲线制作： 锌：100ug/ml Zn标准液用0.1mol/L HCl 定容至25ml比色管中，再10ml比色管中配制标准工作曲线系列，0.1mol/LHCl定容至10ml。 样品制备: 橘汁样品: 取两份离心后的果汁上清液,分别于10ml比色管, 加镧溶液1.0ml, 用0.1mol/L HCl定容至10ml,测Ca 橘皮样品: 称1.00g碎橘皮于具塞磨口瓶, 加25ml 0.1mol/L HCl, 电动床上摇20min, 然后在电炉上(50-60V) 加热10min, 冷至室温 取两份上述浸取液, 分别于10ml比色管, 加镧溶液1.0ml, 用去离子水定容至10ml,测Ca 测定: WFX-C1型AAS测 3. 气相色谱—质谱连用鉴定橘皮挥发油的化学成分 样品准备: 橘皮20g, 加水100ml, 微沸5hr, 蒸馏,收集蒸馏液50-70ml, 用乙醚30ml*2 萃取, 合并萃取液,浓缩至10ml, 加石油醚(30-60)20ml, 继续浓缩至10ml, 用于TLC及GC-MS分析. 4. 微分脉冲伏安法测果汁中的维生素C 五个10ml 比色管加2mlHAc-NaAc缓冲溶液, 加0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8ml维生素C标准液,制备工作曲线. 橘皮榨汁, 离心后取上层清液作试液 2ml 上述溶液于10ml 比色管, 加2mlHAc-NaAc缓冲溶液, 制两份. 玻碳电极抛光, 超声洗两次 输入参数 作(1)配制的溶液微分脉冲伏安图, 浓度由低到高 作试样的微分脉冲伏安图 玻碳电极抛光后, 用去离子水洗后, 作试样的微分脉冲伏安图, 与(7)对比 【现象记录】 柑橘样品处理过程中的现象记录: 柑橘种类: 四川甜橙 选取个较大的柑橘进行实验, 橘皮颜色比同组的小柑橘深, 为橙色. 虽然个儿大, 但橘皮的总质量小于同组的小柑橘. 橘皮被切碎的程度是本次实验4组同学中最细的, 且碎块较为均匀. HCl浸取橘皮质量 m = 2.0271 g H2O浸取橘皮质量 m = 22.4284 g 用白色榨汁机榨取橘汁, 得到的橘汁经离心后, 是本次实验4组同学中最澄清的, 被选作用于电化学分析. 橘汁味道甘甜, 无酸味. 橘汁静置一天后有凝结成胶体的现象。 H2O浸取的橘皮样品, 由于我们组的速度最快, 因此在加热超声振荡的时间也较长, t ≧ 35 mins 蒸馏提取橘皮中的萜类化合物时, 样品被加热后产生大量气泡, 但气泡的产生对产品的蒸出速度没有影响. 接受瓶中可以观察道有油状物浮于水面, 平铺了将近一薄层发. 蒸出的体积为4组中最多, ~80ml. 在旋转蒸发仪上浓缩后体积较小, 且仔细看浓缩液略微发黄. 【结果及讨论】 原子吸收光谱法测定橘皮及橘汁中Ca的含量: 橘汁样品: 工作曲线的测定: 表1. 工作曲线 编号 1 2 3 4 样品 加Ca(II)浓度 0 1ug/ml 2ug/ml 3ug/ml X ug/ml 吸光度值 0.029 0.148 0.256 0.365 0.150 由表1.做工作曲线 由内插法求样品Ca浓度: y = 0.150 时, x = 1.056 ug / ml, 则原橘汁样品中Ca含量为: Ca(II) = 1.056 ug/ml × 10ml ÷ 0.1ml = 105.6 ug/ml 标准加入曲线的测定: 表2. 标准加入曲线 编号 1 2 3 4 加入Ca(II)浓度 0 1ug/ml 2ug/ml 3ug/ml 加入果汁/ml 0.2 0.2 0.2 0.2 吸光度值 0.273 0.369 0.474 0.576 扣除空白后的吸光度值 0.244 0.340 0.445 0.547 由表2.做标准加入曲线 将标准加入曲线延长至与X轴相交, 则交点横坐标为稀释后样品浓度: y = 0 时, x = 2.386ug/m