PCR、RT-PCR常见问题分析19.pptVIP

PCR RT-PCR 六种Taq和MasterMix： Taq、Pfu、HotStart Taq、Taq plus、Long Taq、Taq Platinum dNTP 引物 SP6,Tn7,M13 Super RNase H- Reverse Transcriptase TA 克隆系统： pBS-T 载体、连接和克隆试剂盒 pGM-T 载体、连接和克隆试剂盒 pCF-T 、pCF-Blunt 载体、快速连接试剂盒 感受态细胞 DNA Marker：22种不同大小的分子量标准 TIANGEN相关产品 PCR引物设计 引物的重要性 引物设计是PCR成功的关键。 PCR引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。 引物设计需要一定的经验，不能单纯依赖软件。 引物设计一般原则：长度 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-24 bp，但长片段扩增时，引物长度30-35 bp。 引物过短易引起错配现象。 例：一个12bp的引物在人类基因组上存在200个潜在的退火位点，而20bp的引物在人基因组上存在的退火位点只有1/400个. 较长的引物（28-35bp)，还常用来区分同源性较高的模板序列或者用于产生一些突变位点。 引物设计一般原则：结构 尽量避免引物序列形成发夹，特别是3‘端。 尽量避免引物间形成二