丙种球蛋白的制备方案.pptVIP

 任务1 丙种球蛋白分离制备方案的制定 生药1111_11_ 第七组 刘行行 目录 丙种球蛋白的基本概述 丙种球蛋白的作用 Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白 丙种球蛋白的日常应用 丙种球蛋白的临床实践 丙种球蛋白预防传染性肝炎，预防麻疹等病毒性疾病感染，治疗先天性丙种球蛋白缺乏症 ，与抗生素合并使用，可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。 预防传染性肝炎，如乙肝、甲肝等。 用于麻疹、水痘、带状疱疹等病毒感染和菌感染的防治。 用于哮喘、过敏性鼻炎等内源性过敏性疾病 与抗生素合并使用，可提高对某些严重细 菌性和病毒性疾病感染的疗效。 主要治疗先天性丙种球蛋白缺乏症和免疫缺陷病。 Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白 一、简介 Sephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。 Sephadex凝胶按交联度不同，用Sephadex G加一个数字来区别型号，数字越小，表示介质交联度越大，分级范围越小，反之亦然。 1、实验器材 层析柱（玻璃柱）、铁架台 2、实验材料 样品液：0.05%核黄素(VitB2)与6%丙种球蛋白等量混合置4oC保存。 3、实验试剂： (1) 洗脱液(pH7.2 ;0.1mol/L磷酸盐缓冲液）:取0.1mol/L磷酸氢二钠720ml和0.1mol/L磷酸二氢钠280ml,混匀。 五、实验过程 1 、 取直径0.8—1.2cm，长度为25cm的层析柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加注蒸馏水2—3ml，排出乳胶管内的气泡，抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。自顶部缓缓加入经膨胀的葡聚糖G-50悬液。待底部凝胶沉积2—3cm时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积至18cm高度即可。操作过程中，应防止气泡与分层现象的发生。让凝胶自然下沉，使表层平整。待凝胶柱层稳定后，以洗脱液(蒸馏水)洗柱5分钟，调节流速至4滴每分钟。 2. 待蒸馏水流至柱面平时，(注意，不可使柱面干掉)，马上沿层析柱内壁小心加4滴样品于柱床面，注意尽量不使床面搅动，马上加入1—2倍于样晶体积的蒸馏水，反复两次后，可加大量蒸馏水连续洗脱，这样可以使样品稀释最小。 3．样品一旦加入后马上用量筒或刻度离心管收集流出液，柱床上不断加蒸馏水，待红色(血红蛋白)流出一半时记录毫升数，此为血红蛋白Ve也为Vo。继续收集流出液，待黄色(核黄素)流出一半时记录体积，此为核黄素Ve。 4．测出柱床体积(Vt)，外水体积(Vo)内水体积(Vi)，及核黄素的洗脱体积(Ve)。并计算出Hb及鱼精蛋的分配系数(Kd)。 5．用蒸馏水反复加在柱床上面，洗柱10分钟然后将柱内凝胶回收入凝胶瓶内。 应用 静注丙种球蛋白治疗小儿病毒性心肌炎 静注丙种球蛋白治疗格林一巴利综合症 静脉注射用丙种球蛋白治疗慢性结肠炎 静脉注射丙种球蛋白防治早产儿高胆红素血症的临床研究 静注丙种球蛋白辅治婴幼儿肺炎的临床及免疫功能观察 * *