基于核定位序列-dna 四面体复合纳米结构的细胞核成像研究.pdf

第40 卷 第5 期 核 技 术 Vol.40, No.5 2017 年5 月 NUCLEAR TECHNIQUES May 2017 基于核定位序列-DNA 四面体复合纳米结构的 细胞核成像研究 1,2 1,2 1 1,2 1,2 1 赵 彦 李 凡 郭琳洁 代江兵 邢 淑 王丽华 1 （中国科学院上海应用物理研究所物理生物学研究室 中国科学院界面物理与技术重点实验室 嘉定园区 上海 201800 ） 2 （中国科学院大学 北京 100049 ） 摘要 基因治疗的关键是如何高效转运基因进入细胞核并发挥作用，实时观察脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)在细胞核中的分布对于了解基因治疗的效果非常重要。其中，载体的安全性、运输效率等是基因治 疗的关键影响因素。本工作构建了核定位序列(Nuclear Localization Signal, NLS)与DNA 四面体的复合结构，提 高了细胞核摄取DNA 四面体的效率。利用“点击”化学反应将NLS 与DNA 四面体进行共价连接，解决了简 单混合带来的稳定性差等问题。进一步研究了不同长度和等电点的NLS 序列在与DNA 四面体连接时的效率， 发现与经典的NLS 12 相比，等电点为4.84 的NLS29 与DNA 的非特异性结合显著降低，连接反应的效率从37.3% 提高到72.3% 。经高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)分离纯化后的NLS 12-DNA 和 NLS29-DNA 均可以靶向细胞核，说明改变 NLS 的长度和等电点后仍保持了很好的活性。该研究改善了正电 NLS 与负电DNA 之间由于非特异性结合容易形成沉淀的问题，为临床基因治疗奠定了基础。 关键词 细胞核，核定位序列，DNA 四面体，“点击”化学 中图分类号 TL99 DOI: 10.11889/j.0253-3219.2017.hjs.40.050501 The nuclei imaging of nucleus localization signal-DNA tetrahedron composite nanostructures ZHAO Yan1,2 LI Fan1,2 GUO Linjie1 DAI Jiangbing1,2 XING Shu1,2 WANG Lihua1 1(Laboratory of Physical Biology, Shanghai Institute of Applied Physics, Chinese Academy of Sciences, Key Laboratory of Interfacial Physics and Technology, Jiading Campus, Shanghai 201800, China) 2( University of Chinese Aca