电泳技术的基本原理.pptxVIP

电泳技术的基本原理;带电物质在电场中向其所带电荷相反的电极移动的现象称电泳。 电泳分离生物大分子的原理： 由于混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同一电场的作用下，它们泳动的方向和速度也不同。因此，在一定时间内各组分移动的距离不同，从而达到分离和鉴定的目的。;在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。 F＝EQ;★ SDS凝胶电泳;SDS凝胶电泳;基本原理;分类;不连续系统;浓缩胶;凝胶由两种不同的凝胶层组成。上层为浓缩胶，下层为分离胶。在上下电泳槽内充以Tris-甘氨酸缓冲液(pH8.3)，上层胶的缓冲液中加入PH=6.8的Tris-HCI,下层中的缓冲液中Tris-HCI的PH=8.8。这样便形成了凝胶孔径和缓冲液pH值的不连续性。在浓缩胶中 HCl几乎全部解离为Cl-，但只有极少部分甘氨酸解离为H2NCH2COO-。蛋白质的等电点一般在pH5左右，在此条件下其解离度在HCl和甘氨酸之间。当电泳系统通电后，这3种离子同向阳极移动。其有效泳动率依次为Cl-＞蛋白质＞H2NCH2COO-，故C1-称为快离子，而H2NCH2COO- 称为慢离子。;浓缩效应之二; 样品进入分离胶后，慢离子甘氨酸全部解离为负离子，泳动速率加快，很快超过蛋白质，高电压梯度随即消失。此时蛋白质在均一的外加电场下泳动，但