糖尿病肾病患者AR基因表达量测定.pdfVIP

V01．31 高等学校化学学报 No．2 CHEMICALOF 293—295 2010年2月 JOURNALCHINESEUNIVERSITIES 糖尿病肾病患者AR基因表达量测定 何永鑫1，李 雪2，范雪梅3，王琬?，王义明1，罗国安1，3 (1．清华大学化学系，2．医学院，北京100084；3．华东理工大学药学院，上海200237) 摘要对50例正常人和80名糖尿病肾病不同分期的患者进行醛糖还原酶(AldoseReductase，AR)基因的表 达量测定，提示AR基因有望成为糖尿病肾病(DN)早期诊断的生物标志物以及DN治疗上潜在的药物靶点， 并且利用AR基因对DN的中医诊断进行了分子生物学验证． 关键词糖尿病肾病；醛糖还原酶；Taqman实时荧光定量PCR 中图分类号0657；Q344+．13文献标识码A 糖尿病肾病(DiabeticNephropathy，DN)是糖尿病常见的慢性微血管并发症之一【lJ，30％-40％的 糖尿病病人发生DN，使其成为终末期肾衰竭的主要原因之一，临床特征为蛋白尿、渐进性肾功能损 害、高血压和水肿，晚期则出现严重肾功能衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一拉’3J．近年来，随 着我国人口人均寿命延长及生活饮食习惯和结构的改变，糖尿病的患病率呈直线上升趋势，由于治疗 方法的改善和生存时间的延长，糖尿病肾病及其它并发症发病率也在增加H≯j，因此应对早期合理治 疗糖尿病和早期诊断治疗糖尿病肾病引起重视．研究显示，糖代谢的多元醇通路与DN等慢性微血管 并发症密切相关旧1．醛糖还原酶(Aldose kb，包 活性改变，将促进糖尿病微血管并发症的发生¨J．功能性AR基因定位于染色体7q35，长约10 存在，AR可催化多种醛以及醛形式的葡萄糖还原为相应的醇捧J．本课题组通过Taqman实时荧光定量 因表达量随DN病情发展变化的趋势，发现了正常人与患者之间以及患者不同分期阶段的AR基因表 达量差异明显(P0．05)，提示AR基因有望成为DN早期诊断的生物标志物以及治疗上的药物靶点． 1 实验部分 1．1样 品 实验样本为正常人和糖尿病肾病患者的血液样本，按照Mogenson分期进行分组p]，由北京中日友 好医院提供．其中，正常样本50例，Ⅱ型糖尿病样本25例，糖尿病肾病Ⅲ期样本18例，糖尿病肾病 Ⅳ期样本16例，糖尿病肾病V期样本21例． 1．2试剂与仪器 Trizol RT Reagent(Invitrogen公司)；Sensiseript PCRPurification RNaise(Tiangen公司)；PureLinkTM 司)；低温高速离心机(Hettich公司)；晶芯RT2Cyeler ABI 7300型荧光定量PCR仪(ABI公司)． prism 1．3实验过程 1．3．1 引物和探针设计采用Oligo软件自行设计醛糖还原酶(Aldose 收稿日期：2009-01-23． 基金项目：国家“九七三”计划项目(批准号：2005CB523503)资助． 联系人简介：罗国安，男，教授，博士生导师，主要从事生命分析化学相关研究．E-mail：luoga@mail．tsingII岫．edu．cn 高等学校化学学报 V01．31 of and Table1 information GAPDH的引物序列(表1)，并由上海 Sequence primersprobes T1’-3’