生化实验凯氏定氮法新版.pptVIP

实验06 植物组织中总氮含量的测定 （微量凯氏定氮法） 材料：面粉仪器设备：消煮炉、海能K9840型自动凯氏定氮仪、Titrette滴定计、分析天平、消化管、蒸馏管、容量瓶、三角瓶、移液管等。试剂： 1. 浓硫酸（AR级）；2. 30-40%（W/V）NaOH； 3. 2%硼酸溶液； 4. 0.01mol/L HCl标准溶液； 5. 混合催化剂； 6. 混合指示剂；  7. 30%H2O2; 8. 标准(NH4)2SO4溶液 简易凯氏定氮蒸馏装置 三、实验步骤 3. 蒸馏（1）使用前仪器检查：检查无氨蒸馏水（蓝色标签）、NaOH（30-40%、黄色标签）、H3BO3（2%、红色标签）三个试剂瓶是否装有规定的试剂、瓶盖是否盖紧（切忌漏气）；电源插头是否接通；冷却水源是否接牢。（2）加样：取10 mL样品消化液转入样品蒸馏管中，安装在定氮仪蒸馏管接口上（注意密接好）；安放承接蒸馏液的三角瓶（集液瓶）。 3. 蒸馏（3）开机：打开电源开关，仪器自动进入“自动、手动可选界面”。（4）参数设置：按“确认”键上、下箭头调光标于自动处，按下确认键，进入“当前参数”界面。参数值常规设置：稀释水量5mL、硼酸体积10mL、加碱体积10mL、蒸馏时间4-5min（第1个样品5 min，以后样品4 min）、淋洗水量5mL。 3. 蒸馏（4）工作：仪器自动显示“集液瓶是否放置到位” 。确认放置到位后按确认键，仪器按设定的程序和参数值进行自动蒸馏，蒸馏中显示顺计时工作状态。蒸馏到预定时间，仪器停止工作且自动回复到“自动、手动”可选界面。取下样品管和蒸馏液瓶用于滴定。（5）再次蒸馏：装上下一个待测样品管和集液三角瓶，按确认键3次后，仪器开始自动再次蒸馏。 3. 蒸馏 （6）空白蒸馏 用未加植物样品的消化液（其余试剂都加入并按同样方法进行消化）为空白液，按样品消化液的蒸馏方法进行蒸馏。注意事项：（1）参数修改：按“修改”键→使用“确认”键周围的上、下、左、右箭头键选择修改指标→输入设定指标值→设定完毕按确认键； （2）从蒸馏仪上取样品管时，应戴上手套或用干抹布包裹操作，以防高温灼伤；（3）杜绝用化学污染的手在界面上操作；（4）当操作失误或出现异常情况时，按“急停”键停止工作；排除故障后，按“返回”键重新操作。 4. 样品及空白滴定 样品和空白蒸馏完毕后，分别用0.01 mol/L盐酸标准溶液滴定，直到硼酸-指示剂混合液变回淡紫红色即为滴定终点，记录滴定样品和空白蒸馏液的盐酸用量。（滴定空白蒸馏液的盐酸用量一般为0.2mL） 滴定计操作（1）打开电源开关，将滴定阀旋至“循环”档；（2）逆时针旋转操作手轮，排出活塞管中空气，再顺时针旋转操作手轮至活塞和溶液上升到约一半位置；如此反复数次，直到汲筒管溶液中无大气泡；（3）旋下滴定管保护螺帽，将滴定阀旋至滴定档，逆时针转动操作手轮，排出滴定管中气泡；（4）按下清零按钮，逆时针缓慢转动操作手轮进行滴定。（5）滴定完成后，记录滴定体积。按下清零按钮，进行下一轮滴定。 注意事项： 为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术和检验实验的准确性及误差，常用已知浓度的标准硫酸铵溶液测试3次； 定氮仪的样品管连接处不能漏气； 取样品管时，小心避免强碱溅在身上引起灼伤或腐蚀衣物等； 使用完毕，切记关好电源和冷却水源。 实验07 抗坏血酸（Vc）含量的测定 （滴定法） 材料：苞菜或其他果蔬仪器设备：蒸发皿、天平、容量瓶、研钵、碱式滴定管、漏斗、移液管等试剂： 1. 2%草酸；2. 碱性2,6-二氯酚靛酚溶液（蓝色）； 3. 0.1mg/mL 标准Vc溶液（用草酸配制） 三、实验步骤 三、实验步骤 注意事项： 样品Vc的提取和定容、标准Vc溶液的配制都要用2%草酸为溶剂； 滴定时要边滴边搅拌蒸发皿中溶液。 * * Designed by XK Wang 氮素代谢在植物新陈代谢中占有重要地位。测定氮素含量对于研究植物的营养生理，以及确定农产品品质、营养价值等均具有重要意义。 动植物组织中的氮包括蛋白氮和非蛋白氮两大类，主要以有机氮形式存在。由于蛋白质的含氮量相对稳定，测定出样品中总氮含量，再乘上一个系数即可得出样品中粗蛋白含量。如要准确测定蛋白质含量，则需利用三氯乙酸将样品中蛋白质沉淀出来，再分别测定蛋白氮和非蛋白氮。 组织中含氮量常用凯氏定氮法测定。 一、原理 在催化剂（如CuSO4、K2SO4、硒粉等）存在的条件下