dna测序仪资料.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 电极弯曲 安装、调整或清洗电极后未进行电极定标操作就直接执行电泳命令，电极不能准确插入各管中 运行前未将样品盘归位、或虽然执行了归位操作，但X/Y轴归位尚未结束就运行Z轴归位等 电泳时产生电弧 主要原因是电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积 其它 测序结束后应将毛细管负极端浸在蒸馏水中，避免凝胶干燥而阻塞毛细管 定期清洗泵块 定期更换电极缓冲液、洗涤液和废液管 （二）平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护 电泳时仪器显示无电流 电泳缓冲液配制不正确 电极导线未接好或损坏 正极或负极铂金丝断裂 正极或负极的胶面未浸入缓冲液中 传热板粘住胶板 主要原因为上方的缓冲液室漏液 其它 倒胶前应按照操作要求认真清洗玻璃板 配制凝胶时应注意胶的浓度、TEMED含量、尿素浓度等 倒胶时需注意不能有气泡 将待测样品加入各孔前，应使用缓冲液冲洗各孔，把尿素冲去，以免影响电泳效果 Smith等于1986年首次建立了一种使用四种不同荧光分别标记四种不同碱基的方法 同年，Ansorge建立了一种使用单色荧光―四甲基罗丹明作为标记染料的自动测序方法 平板法电泳是经典的电泳技术，具有样品判读序列长（600bp～900bp）、一块凝胶板上可同时进行多个样品测序（可达96个）的优点 毛细管电泳为近20年来建立的一种快速、高效、进样量少、灵敏度高的新技术，可测序列达到750bp左右 四、全自动DNA测序仪的进展 单色荧光标记 四色荧光标记 平板型电泳 毛细管电泳 芯片实验室（lab-on-a-chip） 缩微生物处理器（microfabricated bioprocessor），成功完成纳升级标本的Sanger DNA测序 缩微生物处理器结构示意图 2006年，美国科学院院报（PANS）上公布了Blazej等建立的缩微生物处理器测序技术。缩微生物处理器基本结构为3层玻璃薄片和一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间紧密粘合形成圆盘状，直径仅10厘米。聚二甲基硅氧烷是一种新型材料，具有能调控水合作用、通透性好等特点，保证了缩微生物处理器能够准确进行反应。该材料最近在蛋白结晶结构分析中也发挥了重要作用。 五、全自动DNA测序仪的主要应用 人类基因组测序 人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断 法医的亲子鉴定和个体识别 生物工程药物的筛选 动植物杂交育种 第二节 蛋白质自动测序仪 蛋白质顺序指肽链中氨基酸的排列顺序 通常从左至右表示肽链从氨基酸氨基端（N末端）到羧基端（C末端） 蛋白质测序仪工作原理：执行全自动化的Edman化学降解反应和游离氨基酸的分离与鉴定过程 一、蛋白质测序仪的工作原理 Edman降解法 多肽链N末端NH2 ＋ PITC 弱碱 苯异硫甲氨酰肽 TFA 噻唑啉酮苯胺（ATZ）衍生物 ＋ 剩余多肽 弱 碱 苯异硫甲氨酰肽 TFA 噻唑啉酮苯胺（ATZ）衍生物 ＋ 剩余多肽 PTH氨基酸 PTH氨基酸 HPLC HPLC 苯异硫氰酸酯 三氟乙酸 经酸作用，再进一步环化 苯乙内酰硫脲（PTH）衍生物 上述降解循环的偶联和环化发生在测序仪的反应器（筒）中，转化则在转化器进行。 转化后的PTH氨基酸经自动进样器注入高效液相色谱(high performance liquid chromatogram, HPLC)进行在线检测。 根据PTH氨基酸的洗涤滞流时间确定每一种氨基酸。 二、蛋白质测序仪的结构及其各部件的功能 测序反应系统 主要部件为反应器 氨基酸分析系统 由高效液相色谱毛细管层析柱组成 信息软件处理系统 根据氨基酸的层析峰来判断为何种氨基酸 三、蛋白质测序仪的主要应用 新蛋白质的鉴定 在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列 分子克隆探针的设计 用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核苷酸探针。可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选 抗原的人工多肽合成 本 章 小 结 DNA测序仪是检测核酸一级结构 -- 核苷酸线性排列顺序的自动化仪器 工作原理包括Sanger双脱氧链末端终止法或Maxam-Gilbert化学降解法 在单纯以测定DNA序列为目的的全自动DNA测序仪中以双脱氧链末端终止法应用较广泛 本 章 小 结 其原