使用Agilent Cary Eclipse 荧光分光光度计进行各向异性测量.PDF

使用Agilent Cary Eclipse 荧光分光 光度计进行各向异性测量 实现准确测量的通用 器 技术概述 作者 前言 Fabian Zieschang 博士、 科学测量仅在能够准确记录样品特征的情况下才能发挥作用。为确保每个测量结果都具 Katherine cNamara 和 Kevin Grant 有代表性，谨慎的分析人员必须经常检查样品浓度或体积未在分析过程中发生改变，分 安捷伦科技有限公司 析物浓度和信号强度之间的预期关系不存在偏差，以及样品未发生物理变化或光降解。 而使用Agilent Cary Eclipse 荧光分光光度计进行荧光各向异性测量时，分析人员就无需 担心这些复杂因素。这是因为荧光各向异性是一项功能强大的无损分析技术，可实现不 受外部变量影响的稳定可靠测量。Cary Eclipse 荧光分光光度计是唯一一款能够可靠测量 样品且不引起光降解的仪器。由于荧光各向异性的固有分析稳定性，此项技术现已成为 几个重要应用领域中获得准确、精确而可重现数据的常用技术 （表 ）。荧光各向异性测 1 量已提高了准确度，显著推进了科学技术和重要应用的发展。使用Cary Eclipse 进行荧 光测量的优势为整个测量中不会破坏珍贵的样品。 技术概述 荧光各向异性测量采用全部对准到一个方向 （偏振）的光波。当光击中样品后，将与样 品分子发生相互作用并生成可测量的次级信号。如果使用偏振光分析样品且样品中的分 子可自由移动或旋转，那么并非所有次级信号均会发生偏振。在各向异性分析中，我们 准确测量与样品相互作用后的发射光的偏振度，这是获得样品特征的一种强大探测手段。 各向异性测量还可提供关于分子的以下详细信息：体积和形状、是否可轻松移动、在化 学过程中如何变化以及随时间或温度的变化情况。 偏振器是一种光学器件，该器件仅允许一个方向的光通过，同时阻挡其他方向的所有光。 在 Cary Eclipse 荧光分光光度计中，偏振器可放置于样品前后的光束路线中。然后，用 户可使用 Agilent Cary WinFLR 软件记录每次偏振测量的结果，并在不同类型的偏振测 量 （各向异性、偏振或混合功能）之间切换。Cary WinFLR 软件可自动显示样品光谱和 各向异性计算结果 （如果适用）。Cary WinFLR 软件还可在实验进行过程中通过提供实 时分步讲解自动指导用户进行每次各向异性测量。 表 1. 荧光各向异性的一些主要应用领域 领域 应用 聚合物科学 了解聚合物粘度 鉴定分子方向 表征相变温度和类型 液体和聚合物中的局部微粘度 生物系统 监测完全相同的分子之间的FRET （同源 FRET ） 研究酶反应 测定分子排列 估测膜的内部粘度 研究膜的流动性和渗透性 分子生物学 蛋白质的分子量和变性 实时研究蛋白质-蛋白质相互作用 研究蛋白质聚集和齐聚反应