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第 九 章 离子交换层析法 仪器设备简介 离子交换全套装置 第 九 章 离子交换层析 第一节 离子交换层析基本原理 第二节 离子交换剂的分类与性质 第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 第四节 离子交换拄层析操作方法 第五节 离子交换拄层析应用 第一节 离子交换层析基本原理 一、离子交换剂的组成结构及其的特性 二、离子交换剂的选择性 三、离子交换柱层析原理示意图 一、离子交换剂的组成结构及其特性 聚苯乙烯磺酸型阳离子交换树脂的制备 离子交换树脂的形状结构示意图 二、离子交换剂的选择性 1、平衡常数 2、选择性与离子的电荷及 水合离子半径的关系 3、离子浓度对选择性的影响 4、两性物质的选择性 1、平衡常数 值反映离子交换剂对不同离子的结合力或选择性，称为选择系数，此外平衡的移动遵循质量作用定律 若KBA值＞1，即[RB]＞[RA]， 若KBA值＝1，即[RB]＝[RA], 若KBA值＜1，即[RB]＜[RA]， 2、选择性与离子的电荷及水合离子半径的关系 离子交换剂与各种水合离子的结合力是与离子的电荷量成正比，而与水合离子半径的平方成反比。 磺酸基树脂和季胺基树脂对各种离子的相对选择系数 三、离子交换柱层析原理示意图 第二节 离子交换剂的分类及性质 一、离子交换剂分类 二、离子交换剂性质 一、离子交换剂分类 1．疏水性离子交换剂 R-SO-3H + Na+ === R-SO3Na + H+ R-PO（OH）2 + Na+ === R-POOHONa + H+ R-N+（CH3）3 OH- + Cl-== R-N+（CH3）3 ·Cl- + OH- R-N+（CH3）2 OH- + H2O == R-N+（CH3）2 H·OH- R-N+（CH3）2 H·OH- + Cl-=R-N+（CH3）2 H·Cl+ OH- 2．亲水性离子交换剂 磷酸纤维素 CM-纤维素 DEAE-纤维素 CM-交联葡聚糖 DEAE-交联葡聚糖 CM-Sepharose CL-6B 二、离子交换剂性质 颜色与形状 交联度 吸水量或膨胀度 交换容量 稳定性 比重 交换容量 交换容量: 是指离子交换剂与溶液中离子或离子化合物进行交换的能力。 (mg／g或mmol／g、mg／ml或mmol／ml ) 交换容量的测定： 强酸型与强碱型测定其解离盐的能力； 弱酸型与弱碱型测定其中和酸碱的能力。 影响交换容量的因素： 筛孔、离子强度、pH值 。 强酸型阳离子交换介质交换容量的测定法 取一定量的离子交换介质，去离子水溶胀，漂洗干净用1mol／L的NaOH处理，去离子水洗至中性，1mol／L的HCl处理，去离子水洗至中性。然后用1mol／L的NaCl洗脱，收集洗脱液，再通过已标定的NaOH滴定洗脱液中的氢离子浓度，计算出吸附氢离子的毫摩尔数量，除以离子交换介质的质量，即可得到交换容量。 计算公式如下： 强碱型阴离子交换介质交换容量的测定方法 取一定量的离子交换介质，去离子水溶胀，漂洗干净，用1mol／L的HCl处理，去离子水洗至中性，1mol／L的NaOH处理，去离子水洗至中性。然后用1mol／L的NaCl洗脱，收集洗脱液，再通过已标定的HCl滴定洗脱液中的氢氧根离子浓度，计算出吸附氢氧根离子的毫摩尔数量，除以离子交换介质的质量即可得到交换容量。计算公式如下： 凝胶或纤维类弱碱型阴离子或弱酸性阳离子交换介质换容量的测定方法 取一定量的离子交换介质，漂洗干净，用1mol／L的NaCl处理，去离子水洗至中性，缓冲液平衡，用已知蛋白的浓度样品过柱吸附，直至柱内的介质吸附的量达到饱和。用一定浓度的NaCl或其他的洗脱剂洗脱，收集洗脱液，测定洗脱液中的蛋白质的浓度，按如下计算公式交换容量。 第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 一、离子交换剂的选择 二、缓冲液的选择 一、离子交换剂的选择 必须考虑的影响因素 1．阴、阳离子交换剂的选择 2．强、弱离子交换剂的选择 3．不同离子型交换剂的选择 4．不同基质离子交换剂的选择 必须考虑的因素 ①要求 高度的不溶性和疏松的多孔结构或巨大的表面积，较多的交换基团和稳定的物理化学性质 ② 影响因素 对样品生物活性和可溶性的影响 pH对交换基团、分离物电荷及电性强弱的影响 分子大小及共存物质的影响 1．阴、阳离子交换剂的选择 参照电泳结果 测定pI 确定稳定pH范围 碱性分子在偏酸性环境中稳定：细胞色素c 酸性分子在偏碱性环境中稳定：核酸、HCG 离子交换剂的选择图 2、强、弱离子交换剂的选择 3、不同离子型交换