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实验九 氨基酸含量的测定(茚三酮比色法);氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤:;2. 实验材料、仪器与试剂
材料:酱油
仪器:可见分光光度计,分析天平,容量瓶,移液管,具塞刻度试管。
试剂:茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、标准氨基酸(异亮氨酸)。;3. 实验步骤;各种试剂加到比色管后混匀,于电炉上沸水浴15min,取出冷却至室温后加水至10mL刻度线,静置15min后,在570nm处测定吸光度,以氨基酸含量(μg)为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。; 按上表加样后混匀,按标准曲线的步骤进行实验,在相同条件下测定样品的吸光度,并在标准曲线上查出氨基酸含量微克数。;4. 结果计算;5. 说明及注意事项;(3)通常采用的样品处理方法为:准确称取粉碎后的样品5g~10g或吸取液体样品5mL~10mL,置于烧杯中,加入50mL蒸馏水和5g左右的活性炭,加热煮沸,过滤???用30mL~40mL热水洗涤活性炭,收集滤液于100mL容量瓶中,加水至刻度线,摇匀备用。;6. 思考题
(1)茚三酮法测定氨基酸的原理是什么?
(2)试比较三种方法测定氨基酸含量的优缺点各是什么?
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