乌鳢免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的克隆与 - 华中农业大学学报.pdfVIP

第 29 卷 第 1 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 29 　No . 1 20 10 年 　2 月 Journal of Huazhong A gricult ural U niver sit y Feb . 20 10 ,79～84 乌鳢免疫球蛋白 重链和免疫球蛋白 轻链的克隆与特征分析 贾伟章1 , 2 　周秀霞2 1. 广东药学院生命科学院 ,广州 5 10006 ; 2 . 中国科学院水生生物研究所 ,武汉 430072 ( ) ( ) 摘要 　应用 RA CEPCR 方法克隆并鉴定了乌鳢免疫球蛋白 M immunoglobulin M , IgM 重链 H 和免疫 ( ) ( ) 球蛋白轻链 L 全长 cDN A 。乌鳢 Ig H cDN A 全长 1 9 12 个核苷酸 nt ,包含 1 797 nt 的开放阅读框 ,编码 598 ( ) ( ) 个氨基酸 aa 。Ig H 恒定区 CH 均包含 1 对保守的半胱氨酸残基形成链内二硫键 ,其中 C H 1 区氨基末端存在 ( ) 保守的半胱氨酸残基与轻链形成链间二硫键 ,4 个推测的 N糖基化位点 N XT 和 N XS 则分别位于 C H 1 、C H2 和 C H4 。序列比对发现乌鳢 Ig H C H 1 与 C H2 交界处氨基酸序列的插入使铰链区肽段较其他硬骨鱼 Ig H 长 ,此 外 Ig H C H4 区羧基末端参与单体间聚合的半胱氨酸被赖氨酸替换 ,这反映乌鳢 Ig H 分子结构的特异性 。序 列相似性比较显示乌鳢 Ig H 与点带石斑鱼 、黑鳍冰鱼 、牙鲆 、虹鳟的相似性依次为 55 % 、50 % 、45 %和 36 % ,与 ( ) 斑马鱼类的相似性较低 为 2 8 % 。乌鳢 IgL cDN A 全长 94 1 nt ,包含 729 nt 的开放阅读框 ,编码 242 个 aa 。 ( ) ( ) 轻链可变区 VL 和恒定区 CL 均包含保守的半胱氨酸 ,形成链 内和链间二硫键 。序列 比对分析表 明乌鳢 IgL 与五条鰤和花狼 IgL 的相似性为 78 %和 77 % ,而与斑点叉尾鮰和虹鳟的相似性仅为 32 %和 3 1 % 。根据 Ig H 和 IgL 恒定区氨基酸序列构建系统进化树 ,鱼类 Ig H 形成硬骨鱼和软骨鱼两大分支 ,其中乌鳢 Ig H 与河 豚 Ig H 的亲缘关系较近 ;硬骨鱼 IgL 系统树显示 3 个主要的分支 :L 1 、L2 和 L 3 ,乌鳢 IgL 位于 L 1 分支的 L 1A 亚类 。 关键词 　免疫球蛋白M ; 重链 ; 轻链 ; 克隆; 乌鳢 ( ) 中图法分类号 　S