201523001015-杨晓青-PCR仪3.pptVIP

模板来自于 / * 模板来自于 * 模板来自于 * 模板来自于 * 模板来自于 * 模板来自于 * 模板来自于 * PCR仪原理及其操作使用 姓名：杨晓青 学号：201523001015 专业：微生物学 PCR仪的操作步骤 PCR仪的分类与应用 PCR仪的技术原理 A B C Contents 目 录 PCR（Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应，主要用于DNA片段体外扩增，基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。 PCR PCR原理简介 PCR原理示意图 PCR Cycle--Step1 Denaturation Template DNA by Heat(94℃) ?模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使 模板DNA双链解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反 应作准备。 PCR Cycle--Step2 Temperature is lowered (Tm) and primers anneal to target sequences ?模板DNA与引物的退火（复性）：温度降至55℃左右，引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合。 PCR Cycle--Step3 At 72℃ TaqDNA polymerase catalyses primer extension as complementary nucleotides are incorporated. ?引物的延伸：DNA模板与引物结合，以dNTP为原料，合成一条新的DNA链。 End of the 1st PCR Cycle-- Results in two copies of target sequence PCR仪的分类与应用 根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR 仪分为四类: 普通PCR仪 梯度PCR仪 原位PCR仪 实时荧光定量PCR仪 普通PCR仪 一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪。如果要做不同的退火温度需要多次运行。主要用于科研，教学，医学临床，检验检疫等机构。 PCR 梯度PCR仪 一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件，通常有12种温度梯度，这种仪器叫梯度PCR仪。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增。在不设梯度情况下也可做普通PCR扩增。 PCR 原位PCR仪 用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪。保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在位置进行基因扩增。 PCR 实时定量荧光PCR仪 PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。 PCR PCR的操作步骤 1.配置反应体系：引物、模板、buffer,dNTPs,酶，Mg2+(如果是荧光定量 PCR,还需染料或探针）。 94℃预变性 5min 94℃变 性 1min 退火 1min 2.在PCR仪上设置程序 72℃