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实验室生物安全、细菌接种技术和革兰染色 新乡医学院微生物学教研室 办公电话：3029130 监督电话：3029945 EMail：jcbwsw@xxmu.edu.cn 实验一（5个学时） 1.课件首页留任课教师的联系方式以及科教科联系电话（3029945） 2.本次实验目的 （1）通过介绍实验室生物安全方面的相关知识，在医学实践中树立 “有菌的意识，无菌操作的观念” 以保证工作的安全顺利。 （2） 掌握细菌接种的无菌操作技术 （3）掌握革兰染色实验方法并进行细菌基本形态和特殊结构的观察。 3.实验内容（3个） （1）实验室生物安全 (0.5学时) 熟悉 （1）微生物学实验室生物安全意义 （2）实验室规则 例一：1956年，前苏联的一个实验室曾有9支装有感染了委内瑞拉马脑炎病毒的鼠脑的安瓿被打破。由于没采取必要的措施，结果在几天内造成24名工作人员感染。 例二：1998年，我国某大城市的某高校在使用大白鼠进行试验时，有两名学生被大白鼠咬伤，还有一些学生在给实验老鼠放血、解剖的过程中，未按照要求戴手套操作，结果在29名实验人员中，有 9人感染了流行性出血热 可用实验室感染事件的发生引入，说明关注实验室生物安全的重要性，以微生物学实验室相关规则为主，相关注意事项一定要交代清楚。 医学微生物学实验室规则 学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒。 进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定的储物柜内。 严禁在实验室进食、饮水和喧哗打闹。 手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。 实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废料要扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。 实验室意外紧急处理办法 1 皮肤破损：去除异物，生理盐水或蒸馏水洗净后2% 碘酊或2%红汞涂抹。 2 烧伤：局部涂凡士林，2%鞣酸或2%苦味酸。 3 化学药品腐蚀伤：若强酸则先用大量清水冲洗，再用碳酸氢钠溶液洗涤中和；若强碱则先用大量清水冲洗，再用2%硼酸洗涤中和（若伤处为眼部加用橄榄油或者液体石蜡1~2滴滴眼）。 4 菌液入口：立即吐入消毒容器内，1：1000高锰酸钾或3%双氧水漱口，根据菌种服用抗菌药物。 5 菌液污染台面：2%~3%来苏尔或0.1%新洁尔灭覆盖30分钟后抹去，皮肤手指沾染活菌应用上述液体浸泡3分后肥皂和清水洗净。 6 火警：勿慌，立即关闭电闸和煤气闸。若酒精乙醇乙醚等有机溶剂起火切不可用水扑救，可用沙土等物扑灭。 （2）无菌操作技术（1.5学时） 实验目的 1 掌握常用的细菌接种方法 2 熟悉细菌生长现象的观察方法 一、培养基 概念:是人工配制的专供微生物生长繁殖的混合 营养物制品。 成分：充足的营养物质（水分、碳源、氮源、无机盐）；合适的PH； 适宜的温度；适宜的气体环境。 用途：用于微生物的繁殖及分离接种，传代或保存，鉴别微生物的类 属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微 生物制剂等。 分区划线 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后应灭菌. （3）细菌的形态学检查（3学时） 形态学检查分类 一、不染色标本检查(活体）(简单介绍) 悬滴法 压滴法 二、染色标本检查 单染法：简单染色，一种染料 （美兰染色） 复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色） A.革兰染色(Gram stain)（每个学生一张玻片） ①实验目的 1、掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的方法 2、熟悉革兰染色的原理和临床意义 1884年由丹麦医师Gram创立 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义 ②实验原理 （重点讲解通透性学说） ③器材和试剂 1、菌种 白色葡萄球菌 大肠杆菌 2、试剂