在癌细胞中下调皮质肌动蛋白使细胞内吞作用减弱.pdfVIP

2008年 6月 基础医学与临床 June 2008 第28卷 第6期 Basic Clinical Medicine Vo1．28 No．6 文章编号：1001—6325(2008)06—0579—04 研 究 论 文 在癌细胞中下调皮质肌动蛋白使细胞内吞作用减弱 陈 莉 ，朱建伟 ，Zhan Xi (南通大学1．医学院病理教研室；2．附属医院普外科，江苏南通226001； 3．UMB Greenebaum肿瘤中心，马里兰州21450，美国) 摘要：目的探讨皮质肌动蛋白(Cort)对高表达Cort的乳腺癌细胞系(MDA—MB-231细胞)细胞内吞作用的影响。 方法 在MDA—MB-231细胞中使用Cort siRNA干预技术和“生物搬运法”系统将抗Cort免疫抗体(Cort多克隆抗体 001或单克隆Cort抗体4F11)引入MDA—MB一231细胞，进行体内干预Cort功能。根据捕获ELISA法分析转铁蛋白 摄入，免疫印迹分析细胞中Cort敲除的程度和免疫荧光直接检测评价Cort在转铁蛋白吸收中的作用。结果 免疫 印迹分析在Cort siRNA处理过的细胞质中未测出Cort蛋白；用荧光标记评价转铁蛋白密度水平，在Cort siRNA处 理的细胞中要低于含相对高水平Cort的对照组细胞；在接受Cort siRNA处理后仅50％的MDA—MB-231细胞中有转 铁蛋白摄入；在MDA—MB-231细胞中引入001或4F11抗体，其细胞的内吞作用减弱，导致明显的转铁蛋白吸收减 少30％～60％。结论 干扰Cort的功能或直接使用抗Cort抗体进行干预都能抑制细胞内吞作用。Cort是细胞内吞 作用中必不可少的成分，具有重要作用。 关键词：皮质肌动蛋白(Cort)；细胞内吞作用；siRNA；转铁蛋白 中图分类号：R 737．9 文献标志码：A Attenuated endocytosis by down—regulation of cortactin protein in cancer cells CHEN Li ，ZHU Jian—weih ZHAN Xi ， (1．Dept．of Pathology，Nantong University，Nantong 226001；2．Dept．of Surgery，山e Affiliated Hospital of Nantong University Nantong 226001，China；3．UMB Greenebaum Cancer Centre，Maryland 21450，USA) Abstract：0bjecfive To study cortactin function in cancer cell endocytosis．Methods We applied cortactin siRNA interference to MDA—Mb-23 1．a human breast adenocarcinoma cell line in which cortactin was over—ex— pressed，and introduced anti—cortactin immunoreagents into the cells with BioPoner system to interfere with co~actin function in vivo．Capture—ELISA assay was used to measure transferrin uptake．We used immunoblo