滇池水华蓝藻藻蓝蛋白的分离纯化与毒性研究3 - 环境化学.pdf

第 28卷 　第 4 期 环 　境 　化 　学 Vo l. 28, No. 4 2009年 　 　7 月 ENV IRONM EN TAL CH EM ISTRY Ju ly　　 2009 滇池水华蓝藻藻蓝蛋白的分离纯化与毒性研究 1 2 2 1 沈 　强 　沈银武 　刘永定 　刘笔锋 ( 1　华中科技大学生命科学与技术学院 , 武汉 , 430074; 2　中国科学院水生生物研究所水环境工程中心 , 武汉 , 430072) ( 摘 　要 　采用从昆明滇池机械收获的产毒水华蓝藻为材料 , 通过采用抽提 、粗过滤 、微滤 、超滤脱毒 截留 分子量 100 kD a) 、低温静置离心 、真空干燥等提取纯化方法 , 从 1kg微囊藻粉中制备纯度 (A 620 /A 280 ) 高 达 180 的 57g藻蓝蛋白干粉. 小鼠急性毒性试验显示 , 纯化的藻蓝蛋 白无毒性 ; LD50大于 37 1 g ·kg- 1 , 而对照原料藻粉的 LD50为 010 g ·kg- 1. Am es试验结果显示 , 5 个藻蓝蛋白剂量组回变菌落数均未超过阴 性对照菌落数 2倍 , 亦无剂量 效应关系 , Am es实验结果阴性 , 初步通过食品安全性毒理学评价程序. 关键词 　水华蓝藻 , 滇池 , 藻蓝蛋白, 微囊藻毒素 , 超滤 , 毒性. 　　目前 , 机械收藻已应用到滇池蓝藻水华污染治理工作中[ 1 ] . 这种机械方法大量收获蓝藻 , 能在短 期内减少蓝藻生物量 、降低内源水体中氮 、磷营养水平并能加快水体生态恢复 , 但收获蓝藻的巨大生 物量如何进行安全处置 , 成为了一个待解决的新问题. 滇池蓝藻具有生物量大和蛋白质含量高的特点 , 其中藻蓝蛋白含量达细胞干重的 5%以上 [ 2 ] . 藻蓝蛋白可用于食品着色剂 , 作为一种天然的蓝色色素 , 可取代对人类健康不利的合成色素 , 同时具有免疫调节能力和抗癌作用 , 具有很高的利用价值 [ 3 ] . 　　本文就如何有效地对收获的蓝藻合理利用 , 达到既能有效消除环境污染的同时又能有效产生经济 效益展开了深入的研究. 1　实验部分 11　藻蓝蛋白干粉制备 　　微囊藻干粉用机械收获的方法 [ 1 ] 采集 自云南滇池 , 晒干粉碎后低温干燥保存. 1kg干藻粉加入 - 1 ( ) μ 20L 01mo l ·l 磷酸盐缓冲液 pH 68 , 室温下搅拌抽提 3h , 用孔径 50 m 的尼龙筛绢滤布过滤 , 取 滤液. 滤渣继续添加 10L 01mo l ·l- 1磷酸盐缓冲液搅拌抽提 , 过滤后合并滤液. 用 PP6 型蠕动泵 ( ) μ μ ( 上海离心机械研究所 做动力 , 先后将滤液通过 2 m 和 045 m 微滤器 核工业部第八研究所 , JA )