实验4.线粒体和液泡系的超活染色与观察.ppt

实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察 生命科学学院 细胞生物学实验 液泡是普遍存在于植物细胞中，由单层膜围成的贮存水、离子和营养物质（如葡萄糖，氨基酸等）的细胞器。 液泡的功能主要是调节细胞渗透压，积累和贮存养料及代谢产物，溶酶体性质。 低等动物，特别是单细胞动物的食物泡、收缩泡等也属于液泡。 植物细胞中的液泡有其发生发展过程。幼小的植物细胞（分生组织细胞，如根尖、茎尖等处的幼细胞），具有许多小而分散的液泡，呈球形，数量较多。随着细胞的生长，液泡也逐渐长大，互相合并，最后在细胞中央形成一个大的中央液泡。 具有一个中央大液泡是成熟的植物生活细胞的显著特征，也是植物细胞与动物细胞在结构上的明显区别之一。 一、实验目的 观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 观察植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量与分布。 学习一些细胞器的超活染色技术。 二、实验原理 活体染色是利用染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。 可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 活体染色可分为体内活染与体外活染。 体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的。 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在某种结构中而显色。一般应选择那些无毒或毒性小的碱性染料。 詹纳斯绿 B是线粒体的专一性活细胞染色剂，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，从而使线粒体显色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。 三、实验用品： 1、试剂: 1/5000 詹纳斯绿B溶液 1/3000 中性红溶液 2、材料: 人口腔上皮细胞、洋葱内表皮细胞、黄豆胚根根尖 3、器材：镊子、单面刀片、载玻片、盖玻片、牙签、吸水纸 4、设备：显微镜、恒温培养箱 1、线粒体的超活染色与观察 口腔上皮细胞线粒体的超活染色：在干净载玻片上滴1-2滴 1/5000 詹纳斯绿B ，用灭菌牙签刮取口腔上皮细胞制成涂片，于37℃恒温染色10-15min，盖上盖玻片，吸去余液，显微镜下观察。　 洋葱内表皮细胞线粒体的超活染色与观察：干净载玻片上滴 1/5000 詹纳斯绿B 溶液1-2滴，撕取洋葱内表皮浸入染液中，于37℃恒温染色10-15min，盖上盖玻片，吸去余液，显微镜下观察。 四、实验方法与步骤： 2、液泡系的中性红染色与观察 黄豆胚根根尖（1cm大小）纵切面切片，置于洁净的载玻片上； 加1/3000中性红溶液1-2滴，于37℃恒温染色5-10min； 盖上盖玻片，轻轻压扁根尖，吸去余液，显微镜下观察。