牙鲆胚胎程序化冷冻保存研究 - 黄海水产研究所.pdf

第 28 卷 　第 3 期 海 　洋 　水 　产 　研 　究 Vol . 28 ,No . 3 2 0 0 7 年 6 月 MA R IN E F ISH ER IES R ESEA RC H J un . ,2007 牙鲆胚胎程序化冷冻保存研究 1 ,2 1 1 1 1 王春花 　陈松林 　田永胜 　刘本伟 　邓 　寒 ( 1 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 ,青岛 26607 1) (2 上海水产大学 ,200090) 摘要 　　以牙鲆胚胎为材料 ,对胚胎程序化冷冻保存的主要环节进行了探讨 , 以优化牙鲆胚胎的程序 ( ) ( ) 化超低温冷冻保存法 。单一抗冻剂的毒性试验表明甲醇 Met hanol 、1 ,2丙二醇 P G 的毒性低于其 他抗冻剂的毒性 。混合抗冻剂的毒性试验表明 ,20 %～25 %PM 抗冻剂的毒性很低 ,经其平衡处理 的胚胎 ,冷冻至 - 30 ℃,成活率可达 80 %以上 。植冰前采用 2 ℃/ min 的降温速率 ,从植冰后到入液 氮前温度采用 8 ℃/ min 的降温速率效果较好 。入液氮前温度的筛选实验表明 ,入液氮前的温度以 - 45 ℃较好 。利用 20 %PM 和 22 %PM P ,采取优化的降温程序冷冻保存尾芽期的牙鲆胚胎 ,分别 获得 5 枚和 7 枚复活胚胎 ,并全部孵化出膜 。 关键词 　　牙鲆 　　胚胎 　　程序化 　　冷冻保存 中图分类号 　Q65 　　　文献识别码 　A 　　　文章编号 (2007) Study on the cryopreservation of Japanese flounder ( P a r alicht hys olivaceus) embryos by a programmed freezing method WAN G Chunhua1 ,2 　C H EN So nglin1 　T IAN Yo ngsheng1 L IU Benwei1 　DON G Han1 ( 1 Key L aboratory Su st ainable U tilization of Marine Fi sheries , Mini st ry of A gricult ure , Yeallow Sea Fi sheries Research In stit ut e , Chinese Academy of Fi shery Sciences , Qingdao 26607 1) (2 Shanghai Fi sheries U niver sit y , 200090) ABSTRACT 　　St u dy wa s car ried out o