实验六 摇蚊多线染色体的转录实验—摇蚊多线染色体的斑带和“泡 .ppt

实验六 摇蚊多线染色体的转录实验—摇蚊多线染色体的斑带和“泡”(松散区) 一、实验目的 学习剖取摇蚊唾腺及制片方法，识别多线染色体上的斑带。 并观察染色体的疏松区域或称“泡”的变化。 了解染色体结构功能上的变化与细胞分化和功能关系。 二、实验原理 摇蚊性原细胞的染色体数目为8，由于唾腺体细胞染色体的联会，唾腺细胞中的染色体只有4根。这些染色体都是间期染色体，而且是多线化程度不同的内多倍体。 唾腺染色体的特点是染色体伸展情况好，可辨横纹数多，结构细致，个体专一性强。 唾腺染色体上有许多可辨的横纹相当于一个基因，即所谓一个斑带一个基因。经过许多实验证明，当基因活动时，相当此基因的斑带中的纤维松散开来，形成一个疏散的区域或称为“泡”。当该基因不活动时，疏散的核酸蛋白纤维又紧缩成为一个可辨的、明显的斑带。这斑带形态和活动前的完全一样。每根染色体在不同发育阶段的唾腺细胞中，其上具有许多在特异位置上形成“泡”，其数目和形态的表现都随着细胞分化的状况不同而不同。这些特征都具有特异性的。通过这些实验就能感性地认识到染色体的功能和结构变化与细胞分化之间具有一定的因果关系 二、实验原理（“泡”的发生与发展） 三、器材和试剂 1．器材：双筒解剖镜；显微镜；镊子；解剖针；载玻片；盖玻片；培养皿． 2．试剂：醋酸洋红；改良品红；冰醋酸；生理盐水(0.7N NaCl) 四、实验材料 摇蚊幼虫 五、实验步骤 1.唾腺和马氏管摘取 把摇蚊幼虫放在双筒镜下，进行解剖，分离出其消化系统。然后取出所要的唾腺、马氏管、直肠等组织。如只要唾腺的话，可用一根解剖针压在摇蚊幼虫的前部，用另一根解剖针压在头的后部，把前部这根针慢慢地向前移动，拉开。使头部与虫体分开，消化道前部即随头部被带出。我们可看到二个手套型的唾腺，并把它摘下来，供实验应用。 2.解离 加一滴1N HCl水解2-3min. 3.水洗 吸干HCl,用蒸馏水洗2次,吸干. 4.染色 把摘取下来的唾腺或马氏管放在预先滴好醋酸洋红或改良品红的载片上，进行染色。大约染5-10分钟。注意在染色时，不要使染液干掉。 5.压片 用镊子夹取一盖玻片沿染色液面呈倾斜状缓缓放下(注意避免出现气泡),左手固定盖玻片,用右手拇指对着材料压片即可。 6.镜检 100倍搜索染色体图象,400倍寻找最佳图象。 染色体斑带标记图 第Ⅳ染色体上的“泡”A在摇蚊马氏管发育不同阶段中的变化 (a)1.3cm长的幼虫 (b)2.4cm长的幼虫 (c)前蛹期 (d)蛹期 (e)成虫 七、作业 每人制1张染色体分散、斑带、“泡”清晰的临时片。 *