植物生长点转化法的初步建立.pdfVIP

河北师范大学硕士研究生论文 摘要 二十世纪八十年代初发展起来的植物转基因技术在基因水平上改造了植物 的遗传特性，打破了物种之间的隔离障碍，扩展了植物育种的范围，被誉为第二 次“绿色革命”。经过二十多年来的不断探索，转基因技术同臻成熟，目前已经 形成了以农杆菌(Agrobacterium)转化系统和基因枪(Partic]egun)转化系 统为主导的两大植物基因转化系统。 建立一个高效的基因转化受体系统是实现基因转化的先决条件，关系到基因 转化的成败。目前的转基因技术主要依靠植物细胞脱分化和再分化的组织培养方 法，实现外源基因的转移，获得转基因植株。但是该系统也有其局限性，如外植体 脱分化及再生能力的基因型和外植体来源依赖性比较强：转化周期长：细胞脱分 化和再分化中产生的体细胞无性系变异以及转基因植株的育性降低或丧失等等。 因此，建立一种不依赖于愈伤组织培养和不受植物基因型限制的基因转化方法具 有重要的意义。 利用植物分生组织直接进行基因转化，由于不通过愈伤组织诱导培养过程， 体细胞无性系变异小，能较好地保持受体植物的遗传稳定性，转化的外源基因也 能实现稳定地遗传。 本文首先以烟草为材料证明以植物分生组织为受体材料在活体条件下进行 直接转化是可行的。试验中利用农杆菌侵染用玻璃纤维丝刺伤处理的烟草腋分生 组织，切下再生腋芽转移到培养基上诱导生根，并以50mg／L的卡那霉素进行抗 生素筛选。试验结果获得了23株卡那霉素抗性植株，经Gus染色处理后有13 株表现阳性，PCR及点杂交检测证明其中8株为转基因植株。在烟草转化实验基 础上，进一步探讨以小麦茎生长点进行植株直接遗传转化的可能性。农杆菌侵染 MS 小麦种子发芽后3天茎生长点，共培养结束后以含]OOmg／L卡那霉素的1／5 溶液喷洒进行抗生素筛选，结果获得了24株的卡那霉素抗性绿苗并检测到其中 一株呈PCR阳性，初步说明外源基因己整合到小麦基因组中。利用植物生长点进 行基因转化，是摸索一种新型、快速、方便的基因转化方法的有效尝试。 关键词：转化、农杆菌、生长点、Gus 河北师范大学硕上研究生论文 ABSTRACT since of hasbeen 1980sand Technologygenetransformation，whichdeveloping named‘‘thesecond revolution”．hasmodifiedthecharactersof atthe green plants 1evel，brokenthebarriersofthedifferent and the of gene speciesexpandscope 20 theresearchformorethan breeding．Nowadays，through years，two andParticlegun山avebeenestablishedand for systems--AgrobacteriUlTI prevail transformation． plant However,some need for existingproblemssolving．nleke