环境工程微生物学实验顾彦.pptVIP

环境工程微生物学实验;实验一 微生物细胞的计数;?目的要求;实验原理;血球计数板的构造;血球计数板的计算方法;计数公式;实验器材;操作步骤;结果记录;思考题;实验二  培养基的配制和灭菌 ;实验目的;实验原理;实验器材;实验步骤;二、培养基的配制; 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.2~7.4，用精密pH试纸对照。 4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。 5. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染(见图2－3)。分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面（图2－4）。分装入锥形瓶内以不超过其容积的3/5为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜．灭菌后垂直待凝。注意不要污染棉塞和瓶口。 6. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 7. 灭菌备用：灭菌条件：1210C（相当蒸汽压力0.103MPa）培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 ;图 例; 三、稀释水的制备; 四、灭菌;湿热灭菌：高压蒸气灭菌法; 5. 当压力达1.05kg/cm2(灭菌器内的温度为121℃)即开始灭菌，使其维持15～30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物质时，应适当降低压力(0.56kg/cm2) ，延长时间。 6. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品，排出锅内剩余水。 7. 待培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。;间歇灭菌法：; 过滤除菌法：不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。;思考题;实验三 细菌纯种分离、培养和接种技术;实验目的;实 验 器 材 ;实 验 步 骤;(一)稀释平板法;稀释液的制备;; ③ 加热培养基，当其冷至45℃左右时，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针来回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。; ④ 取对照无菌培养皿，倒平板待凝固后，打开皿盖10min后盖上，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。;（二）平板划线法;平板划线分离的划线方法 左：连续划线法（1，2依次划线的起点）右：分区划线法（1，2，3，4依次划线的起点）;二、细菌的接种技术;（一）斜面接种法; ④ 将已灼烧过的接种环伸入菌种试管内。先冷却，而后再用环挑取少许菌种，将接种环抽出并迅速伸入待接种试管底部，在斜面上由底部向上划线。抽出接种环，塞上棉塞将试管插在试管架上，最后再次烧红接种环，则接种完毕。;（二）液体接种和穿刺接种;（三）稀释平板涂布法;（四）液体培养基中的菌种接入液体培养基 接种工具：无菌移液管和无菌滴管 移液管和滴管不能在火焰上烧，应预先灭菌 用无菌移液管自菌种管中吸取一定量的菌液接 到另一管液体培养基中，将试管塞好棉塞即可。;思考题;实验四 滤膜法测定总大肠菌群 ;实验目的;实验原理;实验器材;品红亚硫酸钠培养???（乙）;乳糖蛋白胨培养基;实验步骤; 二、过滤水样; 三、培养; 四、观察结果; 五、实验结果;思考题;实验五 空气中微生物的测定; 了解不同环境条件下，空气中微生物的分布状况； 学习并掌握检测和计数空气微生物的基本方法。;灭菌培养皿、天平、称量纸、恒温箱、 培养基 ;(—) 肉汤蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）;（二）高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）;（三）查氏培养基（培养霉菌）; 落菌法 (1)将肉汤蛋白胨琼脂培养基、查氏琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基溶化后，各倒十五个平板，冷凝。 （2）在一定面积的房间内，按下图的5点所示，每种培养基每个点放三个平板，打开皿盖，暴露于空气中30分钟或60分钟后盖上盖子。 （3）肉膏蛋白胨平板于37℃，倒置培养1天；查氏琼脂平板和高氏一号琼脂平板倒置于28℃培养分别培养24~48h各自计算其菌落数，观察菌落形态、颜色。; ;（4）计算每m3空气中微生物的数量。