南极磷虾肽制备工艺优化及体外抗氧化研究 - 上海海洋大学学报.pdf

文章编号：１６７４－５５６６（２０１６）０５－０７８６－０８ ＤＯＩ：１０．１２０２４／ｊｓｏｕ．２０１５１２０１６２５ 南极磷虾肽制备工艺优化及体外抗氧化研究 张元元，汪之和，陈　敏，施文正 （上海海洋大学 食品学院，上海　２０１３０６） 摘　要：本文研究了３种不同的蛋白酶（木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶）分别水解南极磷虾得到多肽的 体外抗氧化活性，以清除超氧阴离子、羟自由基和ＤＰＰＨ的能力为指标。结果表明，木瓜蛋白酶水解制备的多 肽抗氧化活性比较好，其次是碱性蛋白酶。用响应面法优化木瓜蛋白酶水解南极磷虾制备多肽的工艺参数， 经凝胶电泳测定其分子量，显示该多肽有３个明显条带，其分子量大多位于３～７ｋｕ。将上述多肽溶液脱氟后 经超滤系统分离，按分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ，ＭＷ）大小分为ＭＷ １０ｋｕ，５～１０ｋｕ，ＭＷ ５ｋｕ的３种多肽，并 ≥ ≤ 比较其抗氧化活性的强度。在本实验体系浓度范围内，３种不同分子量的多肽对超氧阴离子、羟自由基、 ＤＰＰＨ的清除能力有所差异，随着多肽浓度的增加，其对清除能力也增大，呈明显的剂量依赖关系。 关键词：南极磷虾；多肽；酶解；超滤；抗氧化；凝胶电泳 中图分类号：ＴＳ２０１．１　　　文献标志码：Ａ 　　南极磷虾（Ｅｕｐｈａｕｓｉａｓｕｐｅｒｂａ）是全球现存的 济、简便，因而目前常采用酶解制肽的方法进行 ［１］ ［５］ 单种生物资源量最为丰富的生物之一 ，具有巨 多肽的制备 。本文还进行了南极磷虾多肽的 大的开发和利用潜力。南极磷虾具有食物和饵 体外抗氧化活性研究。 料用途，还含有比较高的活性成份。如富含以 ［２］ １　材料与方法 ＥＰＡ和ＤＨＡ为代表的Ｏｍｅｇａ－３ｓ 成分。南极 磷虾的蛋白质含量比较高，肌肉鲜样粗蛋白含量 １．１　材料与试剂 ［３］ 为１６．３１％ 。南极磷虾肌肉水解产物中氨基酸 材料：南极磷虾捕于南极海域４８．２区，－２０ 种类丰富，含有１８种，其中包含人体所需的８种 ℃冷冻保存运到实验室。 必需氨基酸 （ＥＡＡ）和 １０种非必需氨基酸 主要试剂：茚三酮、果糖、磷酸二氢钠、碱性 （ＮＥＡＲ）。研究表 明：必需 氨基 酸含量 为 蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等试剂均购于上 海国药集团试剂有限公司， ２５．８８％，占南极磷虾肌肉中氨基酸总量的 ＳＤＳＰＡＧＥ蛋白标准 ［３］ ［４］ ４５．２８％ 。ＣＨＥＮ等 在对磷虾蛋白水解产物 品购于中科瑞泰（北京）生物科技有限公司。 进行分析后，得出南极磷虾蛋白所含的必需氨基 １．２　仪器与设备 酸含量满足ＦＡＯ／ＷＨＯ／ＵＮＵ１９８５推荐的人体对 主要仪器：高速冷冻离心机 Ｈ２０５０（湘仪离 蛋白质的摄取要求。天然的生物活性肽，如肽类 心机仪器有限公司）；ＦＪ２００高速分散均质机；紫 抗生素、生物毒素和激素等，在生物体内含量极 外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）； 低，提取难度非常大，所以难以大规模地生产，形 超滤系统（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓｓｔｅｄｉｍ，Ｖｉｖａｆｉｏｗ２００）；真空冷 成产业化，而通过添加外源酶对组织蛋白进行酶 冻干燥器ＣＨＲＩＳＴＡＬＰＨＡＩ２（北京博劢行仪器有 解，然后从中筛选出具有特定功能的多肽更加经 限公司）。 收稿日期：２０１５１２２７　　　修回日期：２０１６０３０９ 基金项目：国家高技术研究发