小鼠骨髓细胞染色体畸变.pptVIP

实验四、小鼠骨髓细胞染色体畸变分析 实验五、小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）和外周血红细胞微核试验 一、实验目的 掌握小鼠骨髓细胞的制片和染色方法 掌握血涂片和骨髓细胞涂片的制作 三、实验操作 实验动物：昆明种小鼠。实验前12h腹腔注射一次环磷酰胺，实验前3h注射一次秋水仙素。 1、颈椎脱臼法处死小鼠 2、制外周血涂片：将受试小白鼠的尾端剪断，用干净的载玻片靠近一端蘸一滴血；用另一边沿平滑的玻片接触血滴，均匀到推成血涂片，每只小鼠涂片2～3张。血液风干后放入甲醇中固定15min，取出后让其自然风干，以待染色。 注意事项 制作血涂片动作要快，避免血液凝固。 低渗后细胞易破碎，吹打时动作要轻慢。 染色后玻片要尽量冲洗干净，避免染料颗粒影响观察。 注意区分载玻片正反面，用铅笔做记号 * * 二、实验原理 3、骨髓细胞制片（嗜多染红细胞 ） 取出胸骨或前肢股骨，剔去肌肉，用纱布拭净肉渣，剪去胸骨节头或股骨头。 在清洁的载玻片上用6号～8号针头滴一小滴小牛血清，用镊子夹挤骨髓，涂于血清中。 按血液涂片法涂片，每只小鼠涂片2张。两个前肢骨可各做1－2张。 待涂片自然干燥后，置甲醇中固定15min. 取出玻片自然干燥或电热吹干 4、制备骨髓细胞悬液： 剥取小鼠后肢连同两端骨骺的股骨，剔去肌肉，以干净纱布擦去血污和碎肉。剪去两端膨大的骨骺露出骨髓腔，用吸有适量柠檬酸钠的注射器从股骨一端插入针头，将骨髓冲洗入10ml刻度离心管，至股骨呈白色为止。离心管中细胞悬浮液可达4～5ml。 5、低渗处理： 将上述细胞悬浮液经1，000 r/min离心10min。吸去上清液，加0.075 mol/L KCl 6ml ~ 8ml，立即将细胞团块打匀，置入37℃水浴15min ~ 20min。 6、固定： 低渗后小心吸去上清液，沿管壁徐徐加入5ml甲醇：冰醋酸（3：1）固定液（现配），立即打匀，静置20min，此为第一次固定。弃上清液，再重复固定一次，静置20min，弃上清液。最后仅留0.1ml～0.2ml的细胞团和上清液，再加上2～3滴固定液。摇匀成细胞悬液。 7、滴片： 取事先在冰水中预冷的清洁载玻片滴2～3滴细胞悬液，滴液不要重复。用洗耳球轻轻吹散，将载玻片平放自然干燥。每份样品制片两张。 8、染色： 用Giemsa原液 1ml 加 9ml 的磷酸缓冲液（pH6.8），配成使用溶液。直接滴在玻片上染色，染色15min左右。染色后的玻片用细流自来水冲洗，自然干燥。 *