细菌脂肪酶（LIPASE）活性比色法定量检测试剂盒产品说明.PDFVIP

细菌脂肪酶（LIPASE ）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 细菌脂肪酶（LIPASE ）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物三丁酸二巯基丙醇受到脂肪 酶水解，释放出巯基基团，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用 比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心改良、成功实验证明的。 其适用于各种细菌细胞裂解液样品脂肪酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。 技术背景 脂肪酶（lipase ；EC3.1.1.3 ）是可溶性酶蛋白分子，催化不溶性脂质分子的酯键（ester bond ）的水解。许多 细菌产生细胞外酶（exoenzyme ），称为水解酶（hydrolase ），在水分子的参与下，催化底物的水解，成为细 菌生理特征之一。其中脂肪酶（Lipase ），裂解脂肪分子，例如甘油三酯（triglyceride ；TAG ）、脂肪、油等， 产生1个分子甘油（glycerol ）和3个分子脂肪酸分子（fatty acid ），由此用于合成细菌脂质和其它细胞成分， 以及氧化产生能量。食品工业中，常用于食品发酵（rancidity ），例如人造奶油（margarine ）等。甚至用于 厨房清洁剂和替代能源的生物催化作用。同时据此用以识别革蓝氏阴性细菌，例如枯草芽孢杆菌（Bac. Subtilis ）等。细菌脂肪酶在水分子的参与下，催化三丁酸二巯基丙醇（dimercaptopropanol tributyrate ；DMPTB 或BALB ）的水解，产生二巯基丙醇（dimercaptopropanol ；DMP ），并释放出巯基基团（－SH），与Ellman 试剂5，5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5，5 ’-dithiobis- （2-nitrobenzoic acid ）；DTNB]反应后，产生黄色的 5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB ），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分 析脂肪酶的活性。脂肪酶反应系统为： 产品内容 裂解液（Reagent A ） 毫升 活性液（Reagent B ） 微升 缓冲液（Reagent C ） 毫升 反应液（Reagent D ） 毫升 底色液（Reagent E ） 微升 补充液（Reagent F ） 微升 产品说明书 1 份 保存方式 保存 活性液（Reagent B ）、反应液（Reagent D ）和 底色液（Reagent E ）在－20℃冰箱里，其余的保存 底色液（Reagent E ）避免光照，有效保证6月 在4℃冰箱里； 用户自备 1.5毫升离心管：用于样品操作的容器 微型台式离心机：用于样品制备 1 恒温水槽：用于孵育反应 比色皿或酶标板：用于反应和比色的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析 实验步骤 一、 样品准备 7 1． 准备好xx微升待测细菌（OD600 ＝0.4 至 0.8，即 1 至 2 X 10 细胞/毫升） 2 ． 转移到到 1.5 毫升离心管 3 ． 放进 4 ℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 1000g （或3500RPM，例如EPPENDORF 5415 ） 4 ． 小心抽去上清液 5 ． 加入 xx 微升 裂解液（Reagent A ），充分混匀 6 ． 加入 xx 微升 活性液（Reagent B