透射电镜取材注意事项.PDF

上海釜诚生物科技有限公司 透射电镜取材注意事项 取材是电镜样品制备的第一步，也是十分重要的一步。其操作成功与否直接关系到整个 实验的成败。为了得到好的结果，请务必认真做好最关键的第一步取材。因取材不规 范导致实验失败本公司概不负责！取材基本要点：快 （1min）、冷 （4 ℃）、小 （1 mm3 ）、净 （无杂质）、准 （部位准确） 动植物组织取材流程及要求 取材流程：动物麻醉后，快速取出需要检测的组织，将组织切成1mm3 左右小 块，固定于 2.5%戊二醛固定液4℃过夜后快递。植物组织除麻醉外，其他操作相同。 取材要求： 1.定位准确：解剖水平的准确定位误差应≤1mm。注意各组实验动物取材区位及方 位的一致性和代表性。 2.操作迅速：组织离开活体后，以最快的速度浸入戊二醛固定液，0.5 min 或最多 2 min。事先准备好1.5ml尖头EP管，里面盛满预冷的戊二醛固定液。 3.标本尺寸大小：组织块大小需要在 1mm3 左右，样品太大会导致样品固定不充 分。 （提示：把较大标本块修整成符合要求的颗粒时，须事先准备一个蜡盘，滴入戊二 醛固定液，把标本浸在液滴中修整，确认每个小标本颗粒都包含需要的结构内容，用牙 签挑出3～5粒标本，放入1.5ml尖头EP管。） 4．保持低温环境：为降低自溶酶活性，最好在4℃低温条件下取材，容器和器械预 冷；将修整好的标本块放入戊二醛固定液后，普通 4℃冰箱保存。 细胞取材流程及要求 取材流程：细胞直接刮下，细胞悬液离心，弃上清，PBS清洗2次，离心成团， 加入2.5%戊二醛固定液4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为细胞悬浮液操作。 固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到PBS中，后续操作一致。 取材要求： 1．确认细胞数量充足 （6cm或10cm皿长满），离心后在ep管中绿豆大小； 2．新鲜配置的电镜专用2.5%戊二醛固定液，PH值7.3-7.4； 3．贴壁细胞用柔软细胞划子轻轻刮起成细胞悬液，尽量不要反复来回刮； 4．把细胞悬液置入洁净1.5ml 尖头EP管； 5．选择合适的离心速度和时间离心，一般 1000rpm至3000rpm，5min至 10min(转 速及洗的时间请根据具体情况具体分析，比较脆弱敏感的细胞，尽量低转速、短时间， 以细胞离心成团为准！PBS洗的时间过长，容易造成自噬假阳性)； 6．取细胞团块，如致密团结即弃上清，注入新鲜2.5%戊二醛固定液，4℃保存； 提示： a．取离心好的细胞团块时，如细胞分散，可在离心管中注入约5ul血清后再次离 心，至EP管底部出现致密细胞团块，即送电镜室。 上海釜诚生物科技有限公司 b．细胞大小不同，最佳离心富集速率和时间不同。提前检索文献，避免反复离心损 伤细胞。 需要客户提供的材料： 1、按照标准方法取材固定的实验样本 （固定在戊二醛固定液中的样品）。 2、透射电镜实验登记表，电子版发送到biofcen@163.com。 样本储存运输标准： 1、储存：样本取材后，4℃保存时间不超过 1个月。 2、运输：泡沫盒+冰袋的方式运输，样品用气泡膜包裹，避免标本瓶直接接触冰 块，固定液充满EP管，封口膜封口，以免邮寄途中液体渗出。 附表一：固定液配方 （本公司有售） A、磷酸缓冲液的配方： a液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO4 ·2H2O 17.81克 或：Na2HPO4 ·7H2O 26.83 克 或：Na2HPO4 ·12H2O 35.82 克 加双蒸水至 500毫升 b 液：0.2M 磷酸二氢钠贮备液： NaH2PO4 ·H2O 13.8克 或：NaH2PO4 ·2H2O 15.61克 加