洋桔梗花药培养的影响因素 - 江苏农业科学.PDF

— ２８— 江苏农业科学　２０１３年第４１卷第９期 段　青，吴丽芳，李金泽，等．洋桔梗花药培养的影响因素［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（９）：２８－３１． 洋桔梗花药培养的影响因素 段　青，吴丽芳，李金泽，杨春梅，崔光芬，赵培飞，王祥宁 （云南省农业科学院花卉研究所／云南省花卉育种重点实验室／云南省花卉工程技术研究中心，云南昆明６５０２０５） 　　摘要：以洋桔梗４８个品种为材料，探讨低温预处理、基因型、培养基等因素对洋桔梗花药培养的影响。结果表明： 低温预处理能明显提高洋桔梗愈伤组织的诱导率，在４℃条件下最佳处理时间是４８ｈ；洋桔梗花药培养胚状体的诱导 率与供体植株的基因型有很大的关系，供体基因型不同，胚状体诱导率差异较大；诱导洋桔梗花药产生愈伤组织的最 佳培养基为ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ；不同分化培养基对洋桔梗花药 愈伤组织分化率的影响效果不同，最佳分化培养基为ＭＳ＋２，４－Ｄ１．５０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，分化率达１５．６％。 　　关键词：洋桔梗；花药培养；影响因素 ＋ 　　中图分类号：Ｓ６８１．９０４．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）０９－００２８－０４ 　　洋桔梗（Ｅｕｓｔｏｍａｒｕｓｓｅｌｌｉａｎｕｍ）别称丽钵花、土耳其桔德 生性特征见表１。 州蓝铃，为龙胆科宿根草本花卉，原产于美国南部至墨西哥之 １．２　试验方法 间的石灰岩地带。由于洋桔梗的花形别致，花色清新娇媚，颇 于２０１１年 １１月至２０１２年３月期间采摘花萼与花冠等 具现代感，能配合逐渐洋化的起居环境而大受人们喜爱，其销 长或花冠稍长于花萼的新鲜花蕾（此时花蕾的小孢子大部分 售需求量在日本、欧洲、美国和我国台湾等地急速上升，是目 处于单核靠边期），用自封袋装好，装入冰盒，带回实验室，于 ［１］ 冰箱４℃下低温预处理。自来水冲洗花蕾５～１０ｍｉｎ，在超净 前国际上十分流行的盆花和切花种类之一 ，已成为荷兰鲜 ［２］ 工作台上先用７５％乙醇擦拭花蕾表面，然后用０．１％ＨｇＣｌ 花拍卖市场十大切花之一 。截至２０１２年，我国洋桔梗切花 ２ ２ 消毒８～１０ｍｉｎ，再用无菌水冲洗３次，用无菌滤纸吸干花蕾 种植面积已达２６６．７ｈｍ，国内各地的鲜切花种植户对这个 发展迅猛的新品种表现出浓厚的兴趣，已初步形成产业规模， 表面水分，剥开花蕾，取出花药，去除花丝，接种到愈伤组织诱 但国内生产的洋桔梗近６０％的苗依然依靠进口，缺乏具有自 导培养基上，每个培养瓶接种 １０枚花药。在２５℃条件下进 主知识产权的品种和技术壁垒已经成为制约洋桔梗切花大规 行暗培养，将产生愈伤组织和胚状体的花药转入分化培养基 ［３］ 中，在光照为１５００ｌｘ、温度为２５℃的条件下继续培养，直至 模推广的首要难题 。只有积极开展洋桔梗育种研究，拥有 自主知识产权品种，才能让洋桔梗产业具有更大的发展空间。 分化成苗。 洋桔梗的相关研究以栽培、组织快繁、保鲜与遗传转化等 １．２．１　花药的采集与低温预处理　于２０１１年 １１月至２０１２ ［４－５］ 年３月期间采摘花萼与花冠等长或花冠稍长于花萼的新鲜花 报道居多，涉及到花药培养的研究 较少。作为人工诱导 单倍体的有效技术，花药离体培养是生物技术在农作物育种 蕾（此时花蕾的小孢子大部分处于单核靠边期），用自封袋装 中应用最广泛、最有成效的方法之一，在快速获得纯合体、高 好，装入冰盒，带回实验室，放入４℃冰箱中分别低温处理０、 效利用种质资源和提高选育效率中有一定的理论和应用价