简单真菌分离技术.doc

简易真菌分离技术 植物病原真菌通常采用组织分离、稀释分离、单孢子分离等技术，这里介绍一种我们在研究工作中摸索出来的方法——组织捣碎法，即将寄主植物上形成子囊果、分生孢子器、分生孢子盘或分生孢子角的组织块捣碎，加适量灭菌水，配成菌体悬浮液，再涂抹于培养基平板上生长，最后纯化的方法。 (共1页) 文章关键词: HYPERLINK javascript:f_key(真菌) 真菌 HYPERLINK javascript:f_key(分离技术) 分离技术 HYPERLINK javascript:f_key(植物病原菌) 植物病原菌 HYPERLINK javascript:f_key(组织捣碎法) 组织捣碎法 文章快照:术，这里介绍一种我们在研究工作中摸索出来的方法——组织捣碎法，即将寄主植物上形成子囊果、分生孢子器、分生孢子盘或分生孢子角的组织块捣碎，加适量灭菌水，配成菌体悬浮液，再涂抹于培养基平板上生长，最后纯化的方法。一般具有子囊果、分生孢子器、分生孢子盘等结构的真菌肉眼可见呈小黑点状，在解剖镜下更是清晰，但由于这些结构部分埋生于植物组织内，采用直接挑取单个小黑点的方法不仅难以挑出，而且容易污染；观察这类真菌时将有小黑点的小组织块夹于通草内切片的方法，若将组织块直接用双面刀片跺碎，置显微镜下观察时通常会见到组织块内有大量的孢子(子囊孢子或分生孢子)溢出，这就为组织捣碎进行分离纯化提供了可能。从近几年的实践来看，该方法简单易行，得到的纯菌落量多，成功率高，是真菌分离的一种好方法。1所需器具及操作步骤组织捣碎法所需器具：超净工作台，灭菌研钵，70酒精棉球，灭菌水，移液枪(pipette)，三角玻棒，指形烧杯，PDA平板，镊子，酒精灯。分离时，在超净工作台内，把带有小黑点的植物组织块用70酒精棉球擦拭，清除表面杂菌，再将组织块放人装灭菌水的指形烧杯内清洗3次，用灭菌镊子夹取，移人灭菌研钵内，捣碎，加少许灭菌水配成悬浮液，混匀，移液枪吸取2oo~1放于PDA平板上，用灭菌三角玻棒推匀，倒置于25℃温箱内培养。2适应范围该组织捣碎分离方法对许多在寄主组织表面产生小黑点或分生孢子角，用单孢分离法不易操作的真菌都适合，如甘薯长喙壳、苹果黑腐皮壳菌、梨黑星病菌、芹菜斑枯病菌、茄褐纹病菌等许多子囊菌、半知菌的分离纯化，对不产生孢子，只形成菌丝的真菌，如小麦纹枯菌、棉花猝倒病菌等亦适用，但对一些表面污染严重的寄主组织用这种方法则难以得到纯培养物。3主要优点(1)分离得到的纯化菌落量多(由于小黑点内的孢子量大或被捣碎的菌丝段多)，分离的成功率很高。(2)尽管操作需在无菌操作间内进行，但由于所需器具简单，操作简便，而且不易污染，对于初学分离培养者来说，该方法一学即会，易于掌握。(3)对于易失水、易腐烂的叶部真菌病害，特别是所得的病害标本很少，用组织分离等方法难以保证成功获得病原物纯培养物的被分离真菌，尝试此方法大多能达到理想的效果。4注意问题(1)真菌的孢子往往产生在发病较久的病组织上，70酒精棉球擦拭虽可将大部分杂菌清除，但由于配成了菌悬液，需要排除细菌污染，可往三角瓶培养液内加入25乳酸(10~l／m1)或链霉素(40~g／m1)混匀后再倒成平板，可以抑制大部分细菌的生长。(2)若操作中没有灭菌过的研钵，可临时改用载玻片，再加一个双面刀片，并在酒精灯火焰上方烧灼灭菌，改捣碎为切碎，吸少量灭菌水冲洗至PDA平板上，也不影响纯菌落的获取。(3)对于病害标本很少的情况，一方面可用上述方法，另一方面可将部分捣碎的菌悬液涂抹于健康的植物叶片上，在适宜条件下让其发病，确保有病害标本的供给。收稿日期：zOO5一Oz一24作者简介：詹刚明(1976一)，湖北省应城市人，在职硕士研究生，主要从事真菌病害研究 一、鸡枞的形态特征鸡枞（学名：Termitomyces albuminosus(Berk)Heim）又名鸡宗、鸡松、鸡脚菇、蚁枞等，是云南的著名特产，因肥硕壮实、质细丝白、鲜甜脆嫩、清香可口，可与鸡肉相媲美，故名鸡枞。鸡枞，担子菌纲，伞菌科高营养食用菌。子实体中至大型，刚出土时，菌盖圆锥形，伸展后呈斗笠状，中间有一明显的乳头状突起，菌直径10－20厘米，菌盖表面光滑，潮湿时有黏性，前期灰褐色，中期奶油色，后期灰白色，乳突部分深褐色，少数菌有辐射状。撕裂；菌褶白色，肉质厚实。菌柄中生，粗细不等，多肉质，白色或与盖同色，地下部分褐色至黑色，表面平滑，易于开裂，柄长3~15厘米，直径0.5~2，基部膨大处可达1.5－3．5厘米；假根长11~27厘米，以至70~80厘米，端部像蚂蝗的吸盘一样，生于菌圃表面。抱子呈卵园形，7~10.5微米×4.5微米,白色或奶油色。二、鸡枞的分布与生态环境鸡枞菌主要分布于亚洲、非洲热带地区；南太平洋岛屿和亚洲的亚热