dna重组技术的基本工具2 课件.pptVIP

专题1 基因工程 2010年2月23日 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.2 基因工程的基本操作程序 1.3 基因工程的应用 1.4 蛋白质工程的崛起 1.1 DNA重组技术的基本工具 概述：切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。现在已分离出约4000种限制酶。限制酶能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 1.酶的种类： 作为基因工程运载体的条件 谢谢! * * 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 什么是基因工程？ 转基因生物 专题1 基因工程 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——运载体 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 思考： （1）见寻根问底一； （2）见思考与探究。 特点： 限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且在特定的位点切割DNA分子。（专一性） 例如： 大肠杆菌(E.coli)的EcoRⅠ限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 黏性末端 黏性末端 回文序列 如何切割DNA分子呢？ DNA分子 磷酸二酯键 切割DNA分子实质是断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 切割DNA分子后形成什么呢？ 产物： 黏性末端（在中轴线两侧切割DNA） 平末端 （在中轴线处切割DNA） 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 过程见图1-3 二、DNA连接酶—“分子缝合针” （1）E·coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来。 （2）T4 DNA连接酶（噬菌体） 两种酶的区别： （1）E·coli DNA连接酶（大肠杆菌） （2）T4 DNA连接酶都能连接黏性末端和平末端，但连接平末端之间的效率比较低。 2.酶的作用： 将双链DNA分子片段“缝合”起来，恢复两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 二、DNA连接酶—“分子缝合针” A A T T G C C T T A A G 磷酸二酯键 磷酸二酯键 DNA复制 思考：“寻根问底二” DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？ DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的单链核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键,需要摸板。DNA连接酶是连接两个双链DNA片段的末端，形成磷酸二酯键,不需要摸板。 　　要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。常用的载体是质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 三、基因进入受体细胞的载体—“分子运输车” ①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 ②具多种限制酶切点，以便与外源基因连接。 ③具有某些标记基因，便于进行筛选。 ④载体是安全的，不能对受体细胞有害。 ⑤载体DNA分子大小应合适，以便提取和在体外进行操作。。 练习 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 2.基因工程常用的受体细胞有（ ） （1）大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） A B