SOP标准操作程序-Cho.docVIP

SOP标准操作程序 胆固醇（货号：OSR6116，OSR6216） 实验原理： 胆固醇的测量主要用于诊断和治疗各种紊乱，包括血液中胆固醇过高，脂类和脂蛋白代谢紊乱。 血清总胆固醇分析已被证明在高脂蛋白血症，动脉粥样硬化症，肝病和甲状腺病的诊断中是有效的1。总胆固醇和HDL胆固醇，与甘油三酸脂测定结合，为冠心病的预测提供了有价值的信息2。 对皂化的血清提取液总胆固醇的测定使用“胆固醇脱氢酶”开始于Flegg3和Richmond4。以前，Hernandez，Chaikoff5和Hyun等人6已经分离出了一种胆固醇酯水解酶，这种酶对从胆固醇酯中产生出游离胆固醇是有效的。最后，在1974年，Allain等人7和Rieschlau等人8将酯酶和氧化酶结合成一种单一的酶试剂，用于测定总胆固醇，这是奥林巴斯AU640胆固醇方法的基础。 奥林巴斯AU640胆固醇试剂已被证明其精确度满足NCEP执行标准。 血清中的胆固醇酯被胆固醇酯酶（CHE）水解，产生的游离的胆固醇被胆固醇氧化酶氧化，同时产生胆烯酮和H2O2，所产生的H2O2与4-氨基安替比林和苯酚形成醌亚胺，产生的颜色在540/600nm吸光度变化与胆固醇的含量成正比。 胆固醇脂酶 胆固醇脂+H2O-------------﹥胆固醇+脂肪酸 胆固醇氧化酶 胆固醇+O2-------------﹥胆烯酮+ H2O2 过氧化物酶 H2O2+4-氨基安替比林+苯酚-------------﹥醌亚胺+ H2O 标本： 病人准备：如果只测定胆固醇，无特殊要求。 类型：血清、肝素或EDTA血浆，标本最好不要溶血。留取标本后请尽快分离血清/血浆。血浆不建议使用草酸盐，柠檬酸盐或氟化物之类的抗凝血剂9。 标本稳定性：血清总胆固醇在4℃时稳定至少7天，在-20℃时稳定三个月，在-70℃时可稳定几年9。 仪器与材料: 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪 材料：奥林巴斯AU640胆固醇 参与反应成份的最终浓度： 磷酸盐缓冲液（PH6.5） 103mmol/L 4-氨基安替比林 0.31mmol/L 苯酚 5.2mmol/L 过氧化物酶（辣根） ≥10KU/L 胆固醇脂酶（念珠菌属） ≥0.2KU/L 胆固醇氧化酶 （短杆菌属） ≥0.2KU/L 其中含有保护剂。 注意：1. 此试剂为体外诊断用。 2. 警告！有毒！含有苯酚，吞服有致命性的危险。避免与眼睛，皮肤或粘膜接触。如果外部接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位。接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。 3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。 试验用试管的直径在12～16mm。 定标液：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）。 试剂准备：奥林巴斯AU640的胆固醇是即开即用的。无需特殊准备。 执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640胆固醇已经建立的程序。 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的一贯的方法13，AU640批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 N=100 批 内 精 密 度 总 精 密 度 平均值（mg/dL） SD CV% SD CV% 116 0.5 0.5 1.3 1.1 159 0.4 0.3 1.4 0.9 252 0.9 0.3 2.7 1.1 方法学比较： 血清：奥林巴斯AU640胆固醇（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做183个病人标本。相关系数达到0.9998，回归方程如下： 胆固醇方法1=（胆固醇方法2×0.989）+0.3 病人结果数值分布： 22～488 mg/dL 敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化1.1毫吸光度为1 mg/dL。 试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。 2.开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。 变质指示：正常的粉红色试剂变色或浑浊度增加，表明试剂已变质，不能继续使用。 校准： 标准液的准备：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）。奥林巴斯定标液是即开即用的，无需特殊准备。 校准程序：每30天需要定标一次。胆固醇定标程序用奥林巴斯定标物，可追踪到全国科学技术学会（NIST）标准参考材料（SRM）909b1b2。 当有以下情况时需要重新定标： 换试剂批号或出现质控漂移时。