酵母细胞表面展示技术.PDFVIP

动物营养学报２０１１，２３（１１）：１８４７１８５３ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６２６７ｘ．２０１１．１１．００１ 酵母细胞表面展示技术 王佳　孙中远　刘建新 （浙江大学奶业科学研究所，动物分子营养学教育部重点实验室，杭州 ３１００２９） 摘　要：酵母细胞表达体系具备较为完善的蛋白质翻译后修饰和分泌的机制。以酵母为基础 的细胞表面展示技术是一项新兴的真核蛋白展示技术，已成功应用于蛋白质识别、蛋白质的固 定化和定向进化研究，成为了蛋白质工程研究的重要工具。根据与酵母细胞壁的外源目的蛋白 融合部位的不同，酿酒酵母表面展示系统主要分为凝集素系统和絮凝素系统２大系统。将该技 术引入动物营养研究领域，有望通过诱导宿主产生原虫或甲烷菌的抗体，对瘤胃微生态进行调 控，从而以减少甲烷排放；生产高活性的全细胞催化剂，以提高反刍动物和单胃动物对纤维物质 的利用效率。为此，本文就该技术的原理、特点和应用领域进行了综述。 关键词：酵母细胞表面展示；凝集素系统；絮凝素系统 中图分类号：Ｓ８５２．６　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００６２６７Ｘ（２０１１）１１１８４７０７ 　　表面展示（ｓｕｒｆａｃｅｄｉｓｐｌａｙ）是一种新的基因操 作技术，使表达的多肽以融合蛋白形式展现在核 １．１　酵母的表面结构 ［１］ ［２－３］ ［４］ 糖体 、病毒 或细胞 表面，保持相对独立的 　　酵母细胞壁重量达细胞干重的２５％，呈三明 空间结构和生物活性。借以研究多肽的性质、相 治状，外层为甘露聚糖（ｍａｎｎａｎ），内层为葡聚糖 ［５］ ［６］ 互识别和作用 ，筛选特定功能的多肽结构 ，实 （ｇｌｕｃａｎ），都是分枝状聚合物，中间夹着一层蛋白 现蛋白质的固定化和定向进化［７］。该技术发展极 质（包括葡聚糖酶、甘露聚糖酶等多种酶）。外层 为迅速，给生物学诸多领域的研究带来了重大而 甘露聚糖共价连接到内层葡聚糖上。葡聚糖维持 深远的影响，被誉为生命科学研究中又一次技术 细胞壁的强度，甘露聚糖决定细胞表面特性［１０］。 上的重大突破。作为噬菌体表面展示技术和细菌 在单倍体细胞融合形成二倍体的过程中， －交配 α 表面展示技术的有益补充，酵母表面展示技术以 型（ＭＡＴ ）细胞表达的 －凝集素（甘露糖蛋白， α α 其较为完善的蛋白质翻译后修饰和分泌机制、安 ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）可与 ａ－交配型（ＭＡＴａ）细胞表达的 全无毒等独特的优越性，近年来颇受关注。 ａ－凝集素相互作用，介导细胞融合［１１－１２］。在酵 母絮凝过程中，絮凝基因编码的絮凝蛋白（絮凝 １　酵母表面展示技术原理 素，ｆｌｏｃｃｕｌｉｎ）与邻近细胞壁的甘露聚糖结合，致使 　　酵母细胞表面展示技术是一种真核蛋白表达 多细胞聚集［１３－１４］。 系统。其基本原理是将外源靶蛋白基因与特定的 １．２　酵母表面展示系统的类型 载体基因序列融合后导入酵母细胞，融合蛋白诱 　　酵母表面展示系统以酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ 导表达后，信号肽引导融合蛋白向细胞外分泌。 ｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）展示系统发展较为完善。根据外源 由于融合蛋白含有锚定酵母细胞壁的结构，可将