答专家提出的问题-水产学报.DOC

尊敬的《水产学报》编辑： 您们好！ 十分感谢编辑部和两位审稿专家对论文的认真审阅和提出的宝贵意见和建议，我们已按审稿专家和编辑部的要求补充了部分实验，对论文进行了认真的修改或解释，具体修改和解释的内容如下： 二审意见 意见1： 1.1实验材料 “溃疡典型症状”应稍微描述一下。 体表大片溃烂，肌肉坏死出血，尾鳍胸鳍基部红肿溃烂1.3病毒悬液的制备 “…再经0.22 μm的微孔过滤器过滤除菌，过滤后的除菌液放置于-20保存备用”不能保证细菌已经完全清除，可考虑将除菌液再次划平板进行检测，证明无菌后才可以使用。 0.22 μm的过滤器过滤除菌过滤后的除菌液℃保存备用”改为：“再经0.22 μm的过滤器过滤除菌过滤后的除菌液1.5病毒感染实验第三行“病毒感染试验试验”去掉一个“试验”。 1.6第三行“ddH2O”中的“2”位于右下角；第七行“Taq DNA”中的“DNA”字体不对等等，注意书写规范。6 MCP基因的扩增与序列测定”中第一行“根据已经发表的虹彩病毒MCP基因序列[6-9]（AF370008）设计了1对引物，序列如下：P1： 5′-GCGTTTGATGCGATGGAGAC-3′, P2： 5′-ACGGCAGAGACACGGTAGGC-3′，委托上海英骏生物技术有限公司进行合成”改为：“PCR扩增引物P1(5′-GACTTGGCCACTTATGAC-3′)和 P2(5′-GTCTCTGGAGAAGAAGAA-3′)参照参考文献[6]中的鱼类虹彩病毒MCP基因扩增引物设计，并委托上海英骏生物技术有限公司进行合成”。 意见 4：第一行“扩增产物经检测有唯一且与预期大小相符的条带出现，大小约为50bp，而对照样品未检测到扩增条带”提供DNA琼脂糖电泳图像。细菌病原的感染试验：仅仅用划痕感染是不够的，应增加注射或水媒感染途径。细菌感染试验要设置细菌浓度的梯度。病毒感染试验：应从感染死亡鱼体内重新分离病原后再进行第二次感染试验，只用自然发病鱼组织匀浆进行感染试验无法排除细菌毒素导致的感染鱼死亡，因毒素也可以通过超微滤膜。第二次感染如果仍又典型症状死亡，则可怀疑为病毒所致，因细菌毒素无法复制，可排除细菌毒素因素。超薄切片观察：电镜观察照要清晰显示细胞内病毒粒子、细胞器、细胞核等结构，确认病毒增殖部位。如果能将病毒在细胞培养物上进行感染或传代培养后再进行超薄切片观察，其结果将更具有说服力。MCP序列测定：保守序列的同源性分析结果差异太大，不能说明问题。只与有典型代表意义的病毒株序列进行比较即可，并列出序列比对差异结果。本文的英文摘要需要重写。6：文章的讨论部分要和以往的细菌病原分离、病毒病原分离结果进行充分分析。 7：作者还应该考虑的是：在对大口黑鲈这种有典型深度溃疡症状的疾病开展病原研究的时候，其实验设计要十分严谨。迄今为止，发现因病毒感染导致鱼体出现典型深度溃疡症状的疾病还鲜有报道。肌肉组织的深度溃疡有时与厌氧细菌的感染密切相关（水产科学领域目前缺乏对厌氧细菌开展研究的条件）。不能简单排除细菌和病毒病原的复合感染。2009-4-6