cck8刺激小鼠神经元egfr磷酸化动力学研究.doc

CCK8刺激小鼠神经元EGFR磷酸化动力学研究 陈熔1 李娟2 何涛2 （1垫江县人民医院儿科 408300 2四川省泸州医学院分子生物实验室 646000） 摘要 目的：观察八肽胆囊收缩素(octopeptide-cholecystokinin, CCK8)刺激小鼠神经元后，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)磷酸化水平的改变，并分析CCK8刺激神经元不同时间点，EGFR磷酸化的动力学特征，以获得CCK8与EGF信号转导途径交叉对话（cross talk）的相关信息。方法：培养小鼠皮质神经元，随机分成实验组和对照组，实验组分别给予CCK8（10-7mol/L）、EGF(40ng/ml)、CCK8（10-7mol/L）+ EGF(40ng/ml)刺激神经元，对照组采用等量培养基，比较EGFR磷酸化水平的改变。同时将CCK8（10-7mol/L）刺激神经元不同时间后，进行EGFR的磷酸化分析，并绘制时间动力学曲线。结果：分别用CCK8、EGF、CCK8+EGF刺激神经元后，免疫印记分析结果显示上述不同刺激后EGFR磷酸化水平存在差异（P0.05），与对照组比较，CCK、EGF分别刺激后EGFR的磷酸化水平均增强，但是CCK8+EGF刺激后则更为显著，同时CCK8刺激神经元不同时间点后得到EGFR磷酸化水平的时间动力学曲线呈峰型，5min达到最高，之后开始下降，30min时曲线又有轻微地上扬。结论：CCK8可导致神经元中EGFR磷酸化水平改变，表明中枢神经系统中CCK8与EGF信号转导途径之间存在cross talk。CCK8刺激神经元EGFR磷酸化的动力学曲线为峰型，且具有与EGF刺激不同的动力学特征。 关键词：八肽胆囊收缩素、表皮生长因子受体、神经元、磷酸化、免疫印记 Dynamics characteristic of epidermal growth factor receptor Phosphorylation in mice neurons stimulated by octopeptide-cholecystokinin Chen rong1 Li juan2 He Tao2 （1 Dian jiang county peoples Hosptal pediatrics ，dianjiang，chongqing 408300） （2 Molecular Biology Laboratory ofLuzhou Medical College，Luzhou,Sichuan 64600） Abstract [Objective]: To analyze the dynamic characteristic of EGFR phosphorylation in mice neurons stimulated by CCK8and to obtain the relevant information of the way CCK8 and the EGF signal transduction pathways cross talk.[Methods]neurons culturing in vitro.neurons were divided into stimulation group and control group at random.Control and stimulation groups were stimulated with DMEM、(10-7mol /L),EGF(40ng/ml), CCK8 (10-7mol/L) + EGF(40ng/ml) respectively .And Neurons were stimulated with CCK8(10-7mol/L) at different time point.The time course of EGFR phosphorylation plotted based on the seni-quantitive analysis of Western blotting bands. [Results]After stimulated with CCK8, EGF, CCK8 + EGF respectively for 5min , the level of EGFR phosphorylation in neuron were changed significantly compared with the control group (P0.05).However,EGFR phosp