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人全段甲状旁腺素（i-PTH）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：15.6 pg/ml -1000 pg/ml 最低检测限：3.9pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人i-PTH，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中i-PTH 含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任 何影响。 概述 PTH是甲状旁腺主细胞分泌的含有84 个氨基酸的直链肽，分子量为9000，其生物活性决定 于N端的第1-27个氨基酸残基。在甲状旁腺主细胞内先合成一个含有 115 个氨基酸的前甲 状旁腺激素原（prepro-PTH），以后脱掉N 端二十五肽，生成九十肽的甲状旁腺激素原（pro- PTH），再脱去6个氨基酸，变成PTH，PTH释放入血后称全段PTH（intact PTH，I-PTH）。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗i-PTH 抗体的微孔中依次加入标本或标 准品、生物素化的抗i-PTH 抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅 和样品中的i-PTH 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓 度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate ）：一块（96 孔）。 2.标准品（Standard）：2 瓶（冻干品）。 3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。 9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof 管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 -8° C1000 x g离心15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将标本放 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准 曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释 1000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，15.6 pg/ml，样品稀释液 直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15 分钟内配制。 如配制500 pg/ml 标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1000 pg/ml 的上述标准品加入含0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则： 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀