siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞EPO表达的作用.pdfVIP

si RNA沉默…F-1Q对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞EPO 表达的影响 摘要 目的：采用阳离子脂质体介导的转染方法，以RNA干扰为手段，研究HIF—l 件下HIF—l0和EPO的表达，初步探讨HIF一1a在缺氧条件下对人眼脉络膜黑 色素瘤的调控作用。 0％胎牛血清、1％双抗(青一链霉素混合液)的 方法：『F常组OCM-l细胞采用含1 DMEM高糖培养基培养，将细胞置37℃、5％C02细胞培养箱内培养，取处于对数 期生长的细胞用于实验研究。缺氧组OCM一1细胞在原培养基中加入CoCl2至浓 ia 度为100mol／L用于模拟肿瘤内部乏氧微环境。并将缺氧组细胞分为单纯缺氧 组、干扰组、阴性对照组、阳性对照组、脂质体对照组；设计并合成siRNA(siRNA+ 阴性对照+阳性对照)，并在基因库进行Blast同源性分析。利用阳离子脂质体 Lipofectamine⑩2000 OCM—l内。RT—PCR检测OCM—l细胞HIF一1U及EPO在RNA水平上的表达情况， Western blot检测HIF一1U及EPO蛋白表达情况。 结果：缺氧组各组之问相