N_取代马来酰亚胺巯基荧光探针研究进展_梁淑彩.pdf

·478 · 化学通报 　2001 年 第 8 期 　　　　　http :www. chemistrymag. org N取代马来酰亚胺巯基荧光探针的研究进展 梁淑彩 　王 　红 　张治民　张华山 (武汉大学化学与环境科学学院　武汉 　430072) 摘 　要 　评述了测定含 —SH 生物活性物质如肽 、蛋白质等的 N取代马来酰亚胺荧光探针的种类 、 性能、原理 、应用及其进展 。 关键词 　马来酰亚胺 　巯基 　荧光探针 Abstract 　A review with 32 references is given on the sorts ,function ,principle ,progress and application of N substituted maleimide fluorescent probes in the determination of thiolcontaining biologic activated compounds ,such as peptide ,protein etc . Key words 　Maleimide ,Thiol ,Fulorescent probes ( ) 巯基 —SH 是细胞中化学活性最高的基团。在蛋白质中 , —SH 部分是与酶活性有关的最具 ( ) 有反应性的官能团。细胞中的 —SH ,尤其是谷胱甘肽 GSH 作为细胞内的亲核和还原试剂 ,能保护 细胞不受缺氧 、毒素 、诱变 、放射线及许多致癌物的侵害[ 1] 。随着 —SH 官能团在生物体系中的重要 作用逐渐被认识 ,鉴别和定量测定生物巯基化合物 日益受到关注 。传统的检测方法有硝普盐法 、碘 量法 、电流分析法 、分光光度法 、比色法等 ,但这些方法灵敏度低 ,不能适应有些生物样品中巯基化 合物的测定 ,因此需要合成一些高灵敏的分析检测试剂 ,新型的荧光 —SH 衍生试剂成为研究的焦 点 。—SH 荧光探针由于具有灵敏度高 、可以直接测定含 —SH 化合物与试剂的反应速度及可作为 生物结构研究的指示系统等优点 ,而被广泛应用到研究蛋白质的结构和微环境性质 、微量检测胆碱 酶或谷胱甘肽 S转移酶 、组织化学染色 、抗原抗体反应的检测和定位 、疾病的诊断、HPLC 分析巯基 化合物等领域 。已报道的 —SH 荧光探针有芳基卤化物 、丹磺酰氮丙啶类等 ,它们具有好的选择性 和灵敏度 ,对 —SH 的检测限一般可达 10 - 12 mol ,但这些探针 自身都有较强的荧光 ,衍生产物必须经 过分离才能进行检测 ,一般用于 HPLC 柱前衍生[2 ] ;还有一类如苯并呋喃磺酰卤,虽然其 自身荧光 较弱 ,但一般需在碱性条件及高于室温下与 —SH 衍生[3 ] ;最常用来衍生 —SH 的试剂是乙酰卤衍生 物 ,主要是碘乙酰胺衍生物和马来酰亚胺衍生物 ,它们与 —SH 反应快 ,在室温及生理 p H 下即可进 行 ,但前者与 —SH 的加成产物在水解时易失去荧光团 ,且其自身对光不稳定[4 ] ;而马来酰亚胺类荧 光探针与 —SH 的加成产物比较稳定 ,它 自身荧光很弱 ,在与 —SH 加成后荧光增强 ,这种仅在反应 ( 中荧光增强的特性使其表现出独有的优越性 。本文就 N取代马来酰亚胺类巯基荧光探针 简称 NMTFP) 的研究及应用加以评述 。 1 　NMTFP 检测巯基的反应原理 NMTFP 检测巯基的反应原理如下 : 梁淑彩 　女 ,25 岁 ,博士生 ,现从事有机分析试剂及荧光探针的研究。联系人 ( ) 国家自然科学基金资助项 目 收稿 修回 htt