试验五显微镜油浸系物镜的使用.DOC

实验五 显微镜油浸系物镜的使用 ? 实验目的 1．复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术； 2．了解油浸系物镜的基本原理； 3．掌握油浸系物镜的使用方法。 实验内容 1．学习油浸系物镜的使用方法。 2．用压滴法观察酵母菌、枯草芽孢杆菌活菌。 实验原理 （一）显微镜的构造 1显微镜的机械装置 （1）镜座 ?它们是显微镜的基本架，。（2）镜筒 ?镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。 （3）物镜转换器 ?物镜转换器上可安装3—4个接物镜可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。（4）载物台? 载物台中央有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。（5）推动器? 是移动标本的机械装置。（6） ?即粗螺旋螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件。2．显微镜的光学系统 （1）反光镜?由一平面和另一凹面的镜子组成，可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的中央，照明标本。（2）聚光器 ?在载物台下面，它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上，以得到最强的照明，使物象获得明亮清晰的效果。（3）物镜? 物镜的种类很多，可从不同角度来分类： 根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同，可分为： ①干燥系物镜? 以空气为介质，如常用的40×以下的物镜，数值孔径均小于1。 ②油浸系物镜? 常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90×—100×，数值孔值NA大于1。 根据物镜放大率的高低，可分为： ①低倍物镜? 指1×以下； ②中倍物镜? 指×； ③高倍物镜? 指×—65×； ④油浸物镜? 指90×。 （4）目镜 ?目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像映入观察者的眼中。普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成，上端的一块透镜称接目镜，下端的透镜称镜。上下透镜之间或在两个透镜的下方，装有由金属制的环状光阑或叫视场光阑。 （二）光学显微镜的成像原理 显微镜的放大是通过透镜来完成的，单透镜成像具有像差，影响像质。由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜，放大作用更好。图是显微镜的成像原理模式。 （三）显微镜的性能 1数值孔径 也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A，是判断物镜和聚光器性能的最重要指标。 式中： n—物镜与标本之间的介质析射率 α—物镜的镜口角 所谓镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度，见图。 干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.05—0.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则数值孔径最大可接近1.5。 介质折射率对物镜光线通路的影响见图。 2．分辨力 D可用下式表示： D=λ/2N.A. D值愈小，分辨力愈高，物象愈清楚。分辨力（1）减低波长；（2）增大折射率；（3）加大镜口角来提高分辨力。3．放大率： 显微镜的放大率（V）等于物镜放大率（V1）和目镜放大率（V2）的乘积，即： V=V1×V2 （一）观察前的准备 1显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。 2将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。 3调节光照将10×物镜转入光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达到最明亮最均匀为止。 （二）低倍镜观察? 将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。 （）高倍镜观察? （）油镜观察? 1先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2cm，并将高倍镜转出。 2在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 3从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。载物台 4．观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚酒精混合液（乙醚2份，纯酒精3份）或二甲苯，擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注意向一个方向擦拭）。 将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，再将载物台下降至最低，用一个干净手帕将接目镜罩好，以免目镜头沾污灰尘。最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。