分光光度计已经成为现代分子生物试验室常规仪器。常用于核.docVIP

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。 基本原理 分子的紫外可见吸收光谱是由于分子 中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= kcl 式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 组成 ??各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。 1.光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。 热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 2．单色器 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。 单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。 3.吸收池 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。 4、检测器 检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。 5、信号显示系统 常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。 操作步骤 操作之前 1.1　开启电源进行初始化 开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。 1.2　屏幕显示和触摸键盘 UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。选择时，按下相应的数字键或功能键即可，无需按ENTER键确认。此外，输入数值时，如波长设置或显示模式等，必须按ENTER键确认输入值。 下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。 START/STOP键 　　一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。 AUTO ZERO键 按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。 GOTOWL键 该键可用来改变当前的波长。 ENTER键 输入数值后，按该键确认。 Cursor光标键（＜（-），＞） 这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。 Function功能键（F1~F4） 这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。 RETURN键 按下该键可返回当前屏幕的前一屏。 MODE键 用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。 Print打印键 用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。 Numeric数字键 用该键可输入数值。 CE键 用该键可清除数值输入错误。按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。 模式选择和共享操作 初始化完成后即显示模式选择屏幕 各种模式概述： 在模式选择屏幕下选择各种测量模式，即显示各自的参数配置屏幕。 光度模式 在固定波长下测量样品的吸光度或%透光率。 光谱模式 扫描波长范围以测量随波长变化的样品的吸光度和%透光率。也可进行单光束能量测量。对测得光谱可进行数据处理，如峰检出、平滑处理和数学计算等。 定量模式 用标准样品建立校正曲线，并对未知样品进行定量测量。 测量方法有：1、波长法；2、波长法；3、波长法；4、微分定量法。另外，可用下列方法建立校正曲线：K-系数法、单点校正曲线法、多点校正曲线法。 动力学模式 由吸光度随时间的变化计算酶的活性。 若使用多池支架（可选配），最多可测量16个样品。以下是可供选用的测量方法： 1、波长动力学测量；2、波长动力学测量；3、多池动力学测量；4、速率测量。 时间扫描模式 该功能用于测量固定波长下吸光度、透光率或能量随时间的变化。使用多池支架（可选配）最多可测量16个样品，还可以对测得数据进行数学计算等数据处理。 多组分测量模式 可定量分析最多8种组分的样品。使用每种组分的纯品作标准样品，制作校正曲线，进行定量测量。 光度测量（多波