第七章 微流控分析芯片-1 - iis7.pptVIP

Er3+/Yb3+、Tm3+/Yb3+共掺的稀土材料的能级、上转换激发和可见光发射的示意图；实线和虚线分别代表辐射和非辐射能量转移，弯曲的线代表多光子弛豫过程。 上转换材料主要是掺杂稀土元素的固体 化合物，利用稀土元素的亚稳态能级特性，可以吸收多个低能量的长波辐射，从而使人眼看不见的红外光变成可见光(图1)。相比有机荧光染料和量子点等下转换发光标记而言，上转换发光标记因采用近红外连续激光作为激发源，具有较深的光穿透深度、无生物背景荧光干扰、对生物组织几乎无损伤等显著优。 上转换发光成像技术与靶向成像应用 体外细胞和组织成像 (a)本底荧光辐射在单独近红外光的激发下被完全避免 (b)在980nm激发下，可以清楚地观察到强上转换发光而没有自体荧光的干扰 (c)上转换纳米颗粒几乎没有光漂白现象 Anal. Biochem., 1999, 267, 30–36. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2009,106, 10917–10921. Anal. Chem., 2009, 81, 930–935. 活体动物成像 (a)尺寸范围在50~150nm范围内的（。。。）纳米颗粒接种入了活的线虫C. elegans中，接着对其消化系统进行成像监测 ,表现出较好的光学稳定性及生物相容性 (b)利用从近红外到近红外的上转换纳米颗粒对BALB-C小鼠活体成像。其明显优势在于其吸收和发射区间都处于近红外区，使得对成像组织的穿透能力大大加强 Nano Lett., 2006, 6, 169–174. Nano Lett., 2008, 8, 3834–3838. 纳米颗粒在乳腺癌细胞（SK-BR-3）的光学及磁共振成像中的应用 多模式成像 将 掺入晶体基质晶格中，由于钆被广泛用作磁共振成像(MRI)造影剂，因而这种颗粒可以同时用于光、磁造影 Adv. Mater., 2009, 21,4467–4471. 癌症的光能疗法 鉴于癌症细胞在红光照射下易受某些特定的光敏化学物质攻击的发现，人们发明了癌症光能疗法（PDT），这种疗法效率高，对正常组织无侵害性，是一种对癌症或癌变前症较为经济的治疗手段。 大体上讲，PDT包括三个基本步骤： (1)光敏物质由表面修饰的功能分子“导向”到特定的肿瘤细胞或组织中 (2)用预定的剂量照射癌变部位以激活光敏物质 (3)光敏物质释放出活性氧杀死临近异常细胞，而对周围正常组织没有影响。 基于UCNPs的光能疗法 传统的PDT疗法中用以激活光敏物质的光束大约只能穿透一厘米的组织，因而PDT主要用于治疗皮下或内脏表层的肿瘤；其另一个缺点在于其在治疗大肿瘤或扩散性肿瘤时效率较低 UC纳米颗粒近红外的激发光有较强的组织穿透能力，其发出的可见光可以激发光活性物质进而产生ROS。此外，这些纳米颗粒可以较方便地进行癌细胞的目标导向 单光子、双光子、及上转换发光的成像 有机染料的单光子(A)、双光子(B)激发发光及UCNPs的上转换发光(C)的成像原理和形式，以及激发光通过物镜聚焦之后的光子分布示意图(D)[6] 焦点处的光子密度最大，随着与焦点的距离增大，光子密度迅速下降 非焦面的荧光会严重地影响焦面处的图像 针孔技术 内在的三维分辨率 圆锥形分布 激发功率和UCNPs的上转换发光强度之间存在非线性关系 激发功率和发射强度存在平方关系 激光器发出的980 nm 连续激光，首先通过整合扫描镜，然后被物镜聚焦到样品上；从扫描点上产生的发射光被整合扫描镜反射，然后通过一个反式的激发二色分镜(短通)，以滤掉980 nm 激发光；发射光随后通过共聚焦针孔和一个选择收集波长范围的狭缝光栅或带通滤光片，最后进入光电倍增管而被检测。 于共聚焦针孔技术具有“光学切片”能力 激光扫描上转换发光显微成像 laser scanning up-conversion luminescence microscopy, LSUCLM LSUCLM和普通共聚焦荧光显微成像的光漂白情况比较[6] DAPI、DiI 和UCNPs 的发光信号分别用蓝色、红色和绿色表示。(A) 使用高功率980 nm连续激光(焦面处功率为~19 mW) 激发UCNPs，同时使用低功率的405和543 nm 激光(焦面处功率分别为~15 和0.8 滋W) 分别激发DAPI 和DiI；(B) 同时使用高功率的405、543 和980 nm激光(焦面处功率分别为~1.6、0.13 和19 mW) 和传统的单光子、双光子荧光成像技术相比，以UCNPs 为发光探针的LSUCLM 由于采用了980 nm 连续激光作为激发源，具有很多独特的优点： 对有机染料和UCNPs 的光漂白均非