维生素E对阿霉素肾毒性抑制作用的研究.docVIP

　　维生素E对阿霉素肾毒性抑制作用的研究 　　【摘要】 　　目的 探讨维生素E(vitamin E，VE)能否抑制阿霉素(doxorubicin, DXR)的肾毒性。方法 用DXR，DXR与VE处理肾小球内皮细胞(CRL1927)，通过碱性彗星实验检测DNA损伤程度。结果 10 mu;mol/L DXR处理细胞后，彗尾长度明显增加。DXR与VE共同处理细胞后，彗尾长度与DXR处理细胞相比明显变短，并呈时间、浓度依赖性。结论 DXR造成了肾小球内皮细胞的DNA损伤，而VE抑制了DXR的肾毒性作用。 　　【关键词】 维生素E　阿霉素　肾小球内皮细胞 　　【Abstract】 Objective To investigate in E can inhibit the nephrotoxicity of doxorubicin.Methods After DXR in E treated renal mesangial cell (CRL1927), alkaline et assay age. Results After 10 mu;mol/L DXR treated cells, the length of et tails increased obviously. After DXR and VE treated cells together, the length of et tails decreased in time and concentration瞕ependent manner age of renal mesangial cell , VE inhibited the nephrotoxicity of doxorubicin. 　　【Key in E，doxorubicin( DXR)，renal mesangial cell 　　维生素E(vitamin E，VE)又称生育酚，目前自然界有8种，包括alpha;、beta;、gamma;与delta;生育酚以及alpha;、beta;、gamma;与delta;生育三烯酚，其中alpha;生育酚的生物活性最大[1]。VE作为脂溶性抗氧化剂，不仅能清除自由基，还能阻断脂质过氧化，进而保护细胞和组织免受由自由基诱导的氧化损伤[2],维持生物膜的正常结构[3]。环类抗生素阿霉素(doxorubicin，DXR)，是一种具有细胞毒性的化疗药物，广泛地用于各种肿瘤的治疗。DXR细胞毒性在杀伤肿瘤细胞的同时也导致了正常细胞组织的损伤，其肾毒性严格地限制了DXR的使用。故本实验以DXR对肾小球内皮细胞的DNA损伤作用为研究，探讨VE是否能抑制DXR的肾毒性。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂 肾小球内皮细胞CRL1927购于ATCC。最低必需培养基(Eagles minimum essential medium ，MEM )、L2谷氨酰胺、小牛血清均为美国Gibco 公司产品。VE 、DXR、二甲基亚砜(DMSO)及4，6捕脒基2脖交吲哚(DAPI)均购于Sigma公司。Olympus A70 荧光显微镜购自日本Olympus 公司，DYY6C 型电泳仪购自北京市六一仪器厂。 　　1. 2 细胞培养 培养液包含DMEM、10%小牛血清、0.03% L2谷氨酰胺、100 U /ml 青霉素、125 mg/L 链霉素。培养箱设置为37 ℃、5% CO2环境。 　　1.3 药物处理及细胞分组 VE溶于99.5%乙醇，DXR溶于培养液。10 mu;mol/L DXR分别与0.1 mmol/L，1 mmol/L VE合用处理细胞2 h，8 h和12 h。细胞分为空白组(未经药物处理)，溶剂对照组(99.5%乙醇处理)，阳性对照组(10 mu;mol/L DXR处理)，10 mu;mol/L DXR+0.1 mmol/L VE组，10 mu;mol/L DXR+1 mmol/L VE组。 　　1. 4 碱性彗星实验 药物处理细胞后，离心收集，调节细胞浓度至61010/L 。制备三明治凝胶：首先用100 mu;l 0.65%正常熔点琼脂糖，平铺在毛面载玻片上，并盖上盖玻片，置于冰上8 min，使琼脂糖凝固;移去盖玻片，再在第一层凝胶上铺单细胞悬液(15 mu;l 61010/L 细胞与75 mu;l 0.65%低熔点琼脂糖混合) ;最后在第二层凝胶上铺75 mu;l 0.65%低熔点琼脂糖， 第二、三制胶方法同第一层。最后，移去盖玻片，凝胶浸泡在4 ℃碱性裂解液(2.5 mol/L NaCl，100 mmol/L EDTA，10 mmol/L Tris base，1% sodium lauryl sarcosinate，1% Triton X100 和10% DMSO 用前加入，