DNA提取试剂盒（吸附柱法）说明书2017-03-24 - 江苏然科生物技术 .DOC

微量DNA提取试剂盒（吸附柱法） 使用说明书（Cat#RK001-2） 【产品介绍】 随着DNA分析在临床上的应用越来越广泛，获得高质量的DNA是进行分子生物学研究的第一步，也是关键的一步，直接影响实验成败。 微量DNA提取试剂盒采用国际领先的专利技术和多次实验优化的缓冲液体系，有效的提高了硅胶膜吸附柱法对小片段DNA的提取效率，可以从少量人或动物血浆（血清）、体液中分离纯化出高质量、高浓度的游离DNA和病毒DNA。 【产品特点】 1. 效率高：操作简便，提取的游离DNA和病毒DNA浓度高，片段提取率大于95%，提取效率全面超越国外同类产品（图1-3）。结合本公司的Taqman探针荧光定量PCR试剂盒（Cat#RK002-2)、防污染Taqman探针荧光定量PCR试剂盒（Cat#RK002-3)或染料法荧光定量PCR试剂盒（Cat#RK002-4)，可获得更好的游离DNA检测效果。 2. 安全、无毒害：整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质，提取环境更加安全。 3.提取的DNA质量稳定、可靠，可直接用于酶切、PCR扩增、分子杂交和二代测序（NGS）等各种分子生物学实验。 4.本产品适用于从人或动物血浆（血清）、体液中提取纯化游离DNA和病毒DNA。 图1 不同DNA片段回收前后电泳结果。Lane1-2: Marker电泳结果；Lane3-4: 1204bp DNA片段电泳结果；Lane5-6:402bp DNA片段电泳结果；Lane7-8: 268bp DNA片段电泳结果；Lane9-10: 102bp DNA片段电泳结果。Lane1,3,5,7和9：回收后电泳结果；Lane2,4,6,8和10: 回收前电泳结果。 图2 血浆游离DNA片段长度分析结果。Lane1-2: 102bp的β-Globin基因片段结果；Lane3-4: 137bp的SRY基因片段结果；Lane5-6:268bp的β-Globin基因片段结果；Lane7-8:402bp的p53基因片段结果；Lane9-10:1204bp的p53基因片段结果。Lane1,3,5,7,9：进口商品化产品提取的模板；Lane2,4,6,8,10: 本试剂提取的模板。 图3 本产品与进口商品化产品提取的血浆游离DNA荧光定量结果的比较。 【适用仪器】无需特殊设备 【试剂盒组成】 试剂盒组成 数量 保存条件 裂解缓冲液 10ml×1瓶 室温避光保存 吸附缓冲液 10ml×1瓶 室温避光保存 蛋白酶K 0.25ml×1瓶 -20保存 Buffer AW1 12ml×1瓶 室温避光保存 Buffer AW2 12ml×1瓶 室温保存 洗脱缓冲液 1ml×1瓶 室温保存 硅胶柱（含收集管） 50支 4保存 使用说明书 1份 【规格】50T/盒 【贮藏与有效期】 裂解缓冲液、吸附缓冲液和Buffer AW1必须室温（15-25）避光保存；蛋白酶K -20保存；硅胶柱4保存；其它试剂室温保存。产品有效期为1年。 【有效成分】异硫氰酸胍 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇。 【注意事项】 使用前务必认真阅读以下注意事项。 1、吸附缓冲液使用前，加入7.5ml异丙醇，混匀。 2、Buffer AW1使用前，加入18ml无水乙醇，混匀。 3、Buffer AW2使用前，加入28ml无水乙醇，混匀。 4、洗脱缓冲液使用前平衡至室温（15~25℃），洗脱缓冲液温度太低会影响洗脱效果。本洗脱缓冲液含EDTA，根据不同实验目的可以用无核酸酶水（pH值在7.0至8.5之间）或pH8.5的EB替代，提高洗脱温度或重复洗脱可以提高产量。洗脱液的使用量太少会影响洗脱效果，20μl的洗脱量可以保证75%的核酸被洗脱，两次洗脱可以提高20-30%的产量。 【操作步骤】 1、样本处理 血浆（血清）样本的制备：取新鲜EDTA抗凝血（已析出血清的不抗凝血），1900×g离心10分钟，吸取上清；上清16000×g离心10分钟，吸取上清，得到血浆（血清）。短期使用，4保存；长期使用，-70保存。 注：血浆（血清）最大用量为0.2ml，如果样本量大于0.2ml，推荐使用血浆（血清）游离DNA提取试剂盒（吸附柱法）（Cat#RK001-1）。 2、 取200μl样本 (血浆、血清、体液加入1.5ml EP管中（如果样本不足200μl，用PBS补足至200μl。加入等体积裂解缓冲液和5μl蛋白酶K，混匀后金属浴60振荡（1500RPM）孵育30分钟。 3、取出EP管，加入350μl吸附缓冲液，冰浴5分钟。 4、将吸附柱放入收集管中，转移所有液体至吸附柱，盖上盖子，8000×g离心2分钟，调节转速至20000×g再离心2分钟。取出吸附柱，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收