HPLC法测定循环康胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1含量.docVIP

HPLC法测定循环康胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1含量【摘要】 目的 建立HPLC法测定循环康胶囊中人参皂苷Rg?1、Rb?1含量的方法。方法 采用Shim-pack VP-ODS-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 m)，以乙腈(A)和水(B)为流动相梯度洗脱，流动相梯度：0 min(20%A)→15 min (40%A) →20 min(20%A) →25 min(20%A)。流速：1.0 ml/min，柱温：30℃，检测波长：203 nm。结果 人参皂苷Rg?1、Rb?1线性范围分别为2.45～12.25 g、2.65～13.25 g。该方法加样回收率：人参皂苷Rg?1为96.1%、人参皂苷Rb?1为94.9%,RSD分别为2.0%、1.8%。结论 该方法操作简便、准确、可靠，精密度好，可用于循环康胶囊的含量测定。? 【关键词】 循环康胶囊；人参皂苷Rg?1；人参皂苷Rb?1；高效液相色谱 循环康胶囊是由三七、水蛭、灵芝草、茴心草等中药组成的中药复方制剂。具有活血化瘀，改善心脑缺血，解除心绞痛，改善微循环，降低血黏度、胆固醇、三酰甘油、恢复和改善冠心缺血性心电图的功效。主要用于胸闷、胸痛、气短乏力以及治疗血栓后遗症。为了控制该制剂的质量，采用HPLC法同时测定循环康胶囊中人参皂苷Rg?1、Rb?1的含量，为循环康胶囊建立质量标准提供了依据。? 1 仪器与试药? 高效液相色谱仪(日本岛津)，LC-10ATVP泵，SPD-10PVP紫外-可见检测器， CTO-10ASVP柱温箱, SCL-10AVP系统控 制器，CLASS-VPLC工作站。对照品：人参皂苷Rg?1、人参皂苷Rb?1分别由中国药品生物制品检定所提供 (批号分别为：0703-200221 110704 -200318)。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水。循环康胶囊 (批04100402 规格每粒重0.375 g，由云南文山州传统民族医药研究所提供。? 2 方法与结果? 2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：shim-pack VP-ODS (150 mm×4.6 mm，5 um) ；以乙腈(A) -水(B)梯度洗脱，流动相梯度：0 min(20%A)→15 min (40%A) →20 min(20%A) →26 min(20%A)；流速：1.0 ml/ min，柱温：30℃，检测波长：203 nm。在此条件下，组分在25 min内出完，在记录的色谱中，按保留时间先后的出峰顺序为：人参皂苷Rg?1(Rg?1)、人参皂苷Rb?1(Rb?1)，供试品溶液保留时间与对照品溶液保留时间一致，2个成分峰理论塔板数均不低于10 000，Rg?1峰与Rb?1峰分离度大于2.0。空白溶液无干扰。见图A、B、C。? 2.2 溶液的制备? 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg?1、人参皂苷Rb?1对照品适量，加甲醇溶解配制成人参皂苷Rg?1为0.49 mg/ml、人参皂苷Rb?10.53 mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。? 2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取循环康胶囊内容物1.5 g，置100 ml具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，80℃加热回流3 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，蒸干，加水25 ml溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次（25、20、15 ml），合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次,20 ml/次，弃去正丁醇饱和的氨液，再以5 ml正丁醇饱和的水轻轻摇洗，弃去水层，回收正丁醇至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度［1］，摇匀，作为样品溶液。同法制备缺三七的阴性对照。1.人参皂苷Rg?1 2.人参皂苷Rb?1? 图 混合对照品（A）、循环康胶囊（B）和阴性对照（C）的HPLC图谱?? 2.3 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、25 L进行分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制工作曲线，计算回归方程，人参皂苷Rg?1、人参皂苷Rb?1进样量分别在2.45～12.25 g、2.65～13.25 g范围内线性关系良好，见表1。? 2.4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 L，重复进样5次，测定峰面积，结果精密度良好，人参皂苷Rg?1、人参皂苷Rb?1的RSD分别为0.36%、0.42%。? 2.5 稳定性试验 精密吸取上述对照品溶液10 L，每隔1 h测定1次，共测定10次，RSD分别为0.52%、0.78%，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。? 2.6 重复性试验 精密取循