HPLC法测定胃痛平糖浆中原阿片碱.doc

HPLC法测定胃痛平糖浆中原阿片碱【摘要】 目的 建立采用HPLC法测定胃痛平糖浆中原阿片碱含量。方法 采用迪马C??18?(4.6×250 mm，5 μm)色谱柱；以乙腈?三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16?∶?84)为流动相；流速： 0.8 ml/min；柱温：30℃；检测波长为290nm。结果 结果表明原阿片碱进样量在0.1159~1.0433 μg范围内，呈良好的线性关系，平均回收率为99.4 %，RSD=1.0 %(n=6)。结论 该方法简便可靠，专属性强，重现性好，可用于胃痛平糖浆的质量控制。? 【关键词】 胃痛平糖浆；原阿片碱；HPLC 胃痛平糖浆是以白屈菜为君药的制剂，具有缓解止痛、止咳的疗效；用于慢性胃炎，胃溃疡，十二指肠溃疡，胃肠痉挛引起的疼痛及百日咳，支气管炎等。本实验采用HPLC法对胃痛平糖浆中原阿片碱建立了测定方法，为完善该制剂质量标准提供了依据。? 1 仪器与试药? 日本岛津LC?2010 hT全自动高效相色谱仪，原阿片碱对照品(由中国药品生物制品检验所提供)批号：110853?200402，规格：20 mg，供含量测定用。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他为分析醇。? 2 色谱条件与系统适用性试验? 色谱条件：色谱柱为迪马C??18?(4.6×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈?三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)流速： 0.8 ml/min；柱温：30℃；检测波长：290 nm。? 3 方法与结果? 3.1 对照品溶液的制备 取原阿片碱对照品10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加1%盐酸溶液5 ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取适量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液，即得。见图1。? 3.2 供试品溶液的制备 精密量取本品2 ml，加水20 ml，用氨水调至pH 9~10，用乙醚提取4次，30 ml/次，分取乙醚层，用同一份无水硫酸钠脱水，容器、硫酸钠用少量乙醚洗涤，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解并转移置5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm滤膜滤过，即得见图2。? 3.3 阴性对照溶液的制备 按处方(不含白屈菜药材)比例及生产工艺配制阴性，并用供试品溶液制备方法处理阴性对照溶液。依上述色谱条件进行测定。结果阴性对照色谱在与原阿片碱峰相应的保留时间处无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的见图3。? 3.4 测定法 分别精密量取对照品溶液供试品溶液及阴性对照注液各10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法以峰面积计算，即得。供试品溶液与对照品溶液的保留时间一致。阴性对照无干扰测定。? 3.5 标准曲线的制备 精密称取原阿片碱对照品9.66 mg，置100 ml量瓶中，1%盐酸溶液5 ml溶解，用甲醇稀释至刻度，精密量取6 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密量取2、4、6、8、10、12、14、16、18 μl注入液相色谱仪，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=3190+1612986X、r=0.9999，结果原阿片碱进样量在0.1159~1.0433 μg范围内，呈良好的线性关系。? 3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积，平均峰面积为940172，? ?作者单位：130061吉林省职业病防治院(吴爱军);吉林省药检所(汝秋明) ? RSD=0.3%。? 3.7 稳定性试验 精密吸取取供试品溶液，分别在 0、8、16、24、32、40、48、56 h测定原阿片碱峰面积，平均峰面积为828443，RSD=0.7%。? 3.8 重复性试验 取批试品6份，分别按供试品溶液制备方法处理并测定，计算得原阿片碱含量(mg/ml)分别为0.1388、0.1428、0.1418、0.1405、0.1405、0.1406，平均含量0.1408，RSD=1.0%。? 3.9 加样回收试验 精密量取已知含量的供试品(批号含量为0.1408 mg/ml)1 ml，共6份，分别精密加入原阿片碱对照品溶液(0.0483 mg/ml)3 ml，加水20 ml，按供试品溶液制备方法处理并测定，计算回收率，测得原阿片碱的平均回收率为99.4 %，RSD=1.0%结果见表1。? 3.10 样品测定结果 取三批样品按供试品溶液制备方法处理并测定，结果见表2。? 4 讨论? 4.1 测定波长的选择 取原阿片碱对照品的