灰树花的系统发育分析和主要木质素降解酶的测定 - 林业科学研究.pdf

林 业 科 学 研 究 2010, 23( 4) : 574 鶫 580 Forest Research 文章编号: 1001- 1498( 2010) 04-0574-07 灰 树 花 的系 统 发 育 分 析 和 主 要 木 质 素 降解 酶 的测 定 尹立伟, 池玉杰, 王雪童 ( 东北 林业 大学林 学院, 黑龙 江 哈尔 滨 150040) 摘要: 对灰树花菌株迁西二号进行了 ITS 序列扩增与测序 ( GenBank 登录号为 GU584099) , 并对灰树 花及相 关 白腐 菌进行了基于 ITS 序列的系统发育分析, 结果表 明灰树花 与 Grifola sordulenta ( Mont. ) Singer 等 白腐 菌的亲缘关系 较近 。采用 LNAS( 低氮天冬酰胺-琥珀酸) 培养基添加 4 种不同底物, 对菌株迁西二号在 25 ℃恒 温下静置培养, 得 到了不同时间内的培养液, 用紫外可见分光光度计分别检测 了在 470 、420 、310 nm 处对于 2, 6-二 甲氧基苯酚 ( 2, 6- DMP) 、2, 2 ’-连氮-双( 3-乙基苯并唑-6-磺酸) ( ABTS) 、3, 4-二 甲氧基苯 甲醇 / 藜芦醇( VA) 的氧化作用后光密度值 的变化情况, 作为锰过氧化物酶( MnP) 、漆酶( Laccase) 和木质素过氧化物 酶( LiP) 产生和活性大小的依据, 从而获 得了灰树花木质素降解酶系统的主要酶系及其与培养基的成分和酶作用底 物的基本关系。结果表 明, 灰树 花可产 生 MnP 和漆酶, 但不产生 LiP; 对 比 4 种成分不同的培养液酶活力测定结果, 未添加底 物的培养液 MnP 最大酶活仅 为 2. 96 U ·L - 1, 漆酶最大酶活仅为 4. 49 U ·L - 1 。添加底物木屑和 2, 6-DMP 后 MnP 最大酶活为 8. 06 U ·L- 1 , 漆 酶最大酶活为 9. 85 U ·L - 1, 表 明在培养液 内添加酶的底物木屑后能轻微地提高两种酶的分泌量 。 关键词: 灰树花; ITS 序列; 木质素降解酶系统; 锰过氧化物酶; 漆酶 中图分类号: S7 18. 8 1 文献标识码: A Phylogenetic Analysis and Detection on the Maj or Ligninolytic Enzymes System of Grifola frondosa YIN Li-wei, CHI Yu-jie, WANG Xue-tong ( School of Forestry , Northeast Forestry University , Harbin 150040, Heilongj iang, China) Abstract: ITS sequence of Grifola frondosa strain qx2 was amplified and sequenced ( GenBank accession number: GU584099) , a phylogenetic analysis was performed on G. frondosa qx2 and its related white-rot fungi. The results showed that G. frondosa and G. sordulenta had the closest genetic relationship, and G. frondosa was closer to other several white-rot fungi. The strain was stilly cultured at 25 ℃ under 4 diff