Dual-Luciferase报告基因检测系统简明操作指导.PDFVIP

Quick PROTOCOL Dual-Luciferase® 报告基因检测系统 简明操作指导 注意：这是节选操作步骤，详细英文说明书见 适用产品目录号：E1910,E1960,E1980 /protocols/ 需自备的材料： • 磷酸盐缓冲液(PBS) PBS 缓冲液，10X (每升) 11.5g Na HPO 2 4 2g KH PO 2 4 80g NaCl 2g KCl 溶于1 升无菌去离子水中。1XPBS 的pH 应为7.4. 操作步骤： 下面的操作步骤为简化操作指导，更多信息请参考Dual-Luciferase® Reporter Assay System中文操作说明书。 试剂准备： 1. 制备被动裂解缓冲液1×PLB：将1 倍体积的5 ×Passive Lysis Buffer(PLB)加到4 倍体积的蒸馏水中。混合均匀。 储存在4℃ （≤1 个月）。我们建议每次使用前配制新鲜的1XPLB。5XPLB 应储存在-20℃。 2. LARⅡ：用Luciferase Assay Buffer Ⅱ （目录号E1910 和E1960 中的是10ml；E1980 中的是105ml）溶解冻干 粉Luciferase Assay Substrate。存于-20℃ （≤1 个月）或-70℃ （≤1 年）。 ® 3. Stop Glo 试剂： • 取2.1ml 50 ×Stop Glo® Substrate 加到105ml的StopGlo® Buffer。在提供的棕色StopGlo® Reagent 瓶中， 振摇10 秒。建议现用现配。 • 若配制少量的1×Stop Glo® Reagent ：将一定量的50 ×Stop Glo® Substrate 加入到所需要量的Stop Glo® Buffer 中，使终浓度成为1 倍浓度。（例如，加0.2ml 的50 ×StopGlo® Substrate到10ml 的StopGlo® 缓冲液 ® 中，制成1×StopGlo Reagent溶液。） 细胞裂解 细胞裂解第3 步中使用的1×PLB 体积 被动裂解 1．除去培养细胞中的培养基。 培养板 1×PLB 2 ．用 1×PBS 清洗培养细胞。去掉清洗液。 6 孔 500ul 3．按推荐体积（见右表）将 1×PLB 加入到培养孔中。 12 孔 250ul 4 ．被动裂解：在室温轻缓晃动培养板15 分钟，把裂解 24 孔 100ul 48 孔 65ul 液转移到检测试管中。 96 孔 20ul 普洛麦格（北京）生物技术有限公司 电话：800 810 8133 ，010 网址： Quick PROTOCOL Dual-Luciferase® 报告基因检测系统简明操作步骤 操作流程示意图