高效液相色谱邻苯二甲醛衍生化法测氨基酸.pdf

维普资讯 ’，I一2弓 河南预防医学杂毒1998年第9卷第4期 煮 j 23l 高效液相色谱邻苯二甲醛衍生化法测氨基酸 刘红丽 曹元龙，／王宏磊 乏 每 - ， — — ～ ^ — 一 氨基酸是人体必需的营养成分 ，在人们的日常 10倍量的6mo1／l的盐酸．抽去空气．注入氮气，在酒 食物中广泛存在，氨基酸的测定对这些食品的营养 精喷灯下烧结，封住试臂的端 头，置人烤箱 中，在 价值的评价有很重要的作用。在医学上 ．有人用血 I10℃烤 加小时以上即可完成酸水解。 液中的氨基酸分布或某种氨基酸含量或两种氨基酸 这种水解方式将完全地把色氨酸破坏掉．如果 的比值来分析病人的病疾状态和诊断疾病。因此， 要分析色氨酸．则需要用氢氧化钠溶液进行碱水解。 对分析工作者来说，准确地测定体液中、食品中的氨 碱水解可以保留色氨酸，但破坏了胱氨酸、苏氨酸、 基酸就成为一个非常重要的课题。我们根据我站的 丝氨酸和半胱氨酸，并且使氨基酸分子消旋，而变成 工作需要以及具体条件，开展了氪基酸分析测定的 它们的立体异构体。 方法学研究工作 ，现报告如下 ： 我们通常使用酸水解方式处理样品，水解后样 1 氟基酸分析测定工作的现状 品溶液具有强酸性，必须使其达到中性才能进行衍 目前的氨基酸分析工作一般有两种形式：一是用专 生化反应。经典的方法是赶酸法：取 Iml水解液于 用的氨基酸分析仪．该方法具有分析结果准确的优 小烧杯中，置于真空干燥器中抽真空．并将真空干燥 点 ，但是仪器价格昂贵，专用性太强，只能用于氨基 器于在 ∞℃水浴中加热，将水解液中的盐酸挥干， 酸的分析而不能分析其它成份 第二种分析氨基酸 加 Iml水．再挥干 ．再加 Iml水，再挥干，直至溶液变 的方法是用高教液相色谱仪 ．这种分析方法所使用 成中性。 的仪器价格较低．而且该倥器还可用来分析其它化 4 样品的衍生化 学成份 ，但 由于衍生化后的产物稳定性较差，加之梯 溶液中的氨基酸不具有 吸光基团，我们不能直 度洗脱的特点，其分析结果 的精度较前者稍差。分 接采用分光光度计 到它，因此．必须先进行衍生化 析工作者把第一种分析方法称为拄后衍生化法，把 反应。我们用邻苯二甲醛加上琉基乙醇和氨基酸反 第二种分析方法称为拄前衍生化法。根据我们的具 应，这种反应使氨基酸带上苯环．可以用紫外检测器 检测到它，这种反应只能和初级氨基酸进行．初级氨 体条件 ，我们采用柱前衍生化法进行实验。 2 柱前析生化涪的现况和工作原理 基酸的氮原子仅仅和一十碳原子结台．如果和两个 碳原子结合，则称为二级氨基酸．二级氨基酸不能和 目前柱前衍生化法多采用反相分配色谱模式， 紫外或荧火检测器进行定性、定量 ，但所使用的衍生 这种试剂反应．例如脯氨酸，它需要其它的衍生试 化试剂有所不同。我们决定采用部苯=甲醛作为衍 剂。 氨基馥的衍生化反应需要在碱性环境下进行， 生化试剂．其主要原因是因为仪器的匹配性和方法 我们用加有0．4mo1．／l的硼酸盐缓冲液(PH；l0．4)来 的可比较性．卫生部食检所亦采用该试剂作为衍