正交优化用于反相色谱法分离七叶皂甙钠.pdfVIP

正交优化用于反相色谱法分离七叶皂甙钠 1 2 邵勇军 ，顾晓燕 1 江苏金丝利药业有限公司，江苏无锡 (214205) 2 苏州大学第二附属医院东桥医院，江苏苏州（215152 ） E-mail：shaoyj1999@126.com 摘 要：采用正交实验法，将所得数据进行统计分析，对用聚苯乙烯填料反相高效液相色谱 法分离七叶皂甙钠的方法进行优化。结果表明：最佳条件是乙腈浓度为 32 ％、色谱柱柱容 量高、三氟乙酸作离子对试剂、离子对试剂浓度为0.05 ％，该条件下HCRF 值可达715052。 关键词：正交优化；反相色谱；七叶皂甙钠 中图分类号：R284 1. 引 言 七叶皂苷钠是中药娑罗子（Aesculi ）提取物的主要活性成分，它具有消炎、抗渗出、 恢复毛细血管通透性，提高静脉张力，改善血液循环，促进脑细胞恢复等作用[1] 。药用七叶 皂甙钠经反相色谱分离时，仍会有多种成分峰出现[2,3]，而且各成分的比例与药效有着密切 [4] [4~6] 关系 。但不同来源、环境下生产出的七叶皂甙钠的各成分的比例往往不能保持不变 。 因此，就有必要对七叶皂甙钠各成分先进行分离，然后再按比例混和，从而稳定成分之间的 比例来提高质量。 国产聚苯乙烯基质反相色谱柱，不仅稳定性要优于[7]常用于七叶皂甙钠分析、分离的反 [2~6] 相ODS C18 柱 ，而且价格也远低于ODS C18 柱。因此本文将国产聚苯乙烯反相色谱柱用 于分离七叶皂甙，并对分离方法进行优化。 2. 材料与方法 2.1 仪器与材料 Waters600 高效液相色谱系统（美国WATERS 公司）；HW2000 色谱工作站（南京千 谱软件有限公司）；聚苯乙烯反相色谱柱（南京麦科菲高效分离载体有限公司）。 七叶皂甙钠（无锡高润杰生物工程有限公司）；乙腈为色谱纯，三氟乙酸（TFA ）、甲 酸、冰醋酸均为分析纯。 2.2 实验方法 2.2.1 色谱条件 等度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm 。 2.2.2 正交实验设计 选择对七叶皂甙钠反相色谱分离有影响的四项因素，即色谱柱柱容量（高、中、低）、 离子对试剂（甲酸、氟乙酸、冰醋酸）、离子对试剂浓度（体积分数）（0.05 ％、0.10 ％、 0.20 ％）、乙腈浓度（体积分数）（32 ％、35 ％、38 ％）。采用四因素三水平正交试验表 L27(34-1) ，因素安排见表1。 -1- 表1 正交试验各因素、水平表 Tab. 1 the levels of the factors of the orthonal experimental disign 因素 色谱柱柱容量 离子对试剂类型 离子对试剂浓度（％） 乙腈浓度(%) （A ） (B) (C) (D) 1 高 三氟乙酸 0.20 32 2 中 冰醋酸 0.10 35 3 低 甲酸 0.05 38 2.2.3 试验方法 取适量七叶皂甙钠样品，加甲醇溶解并稀释制成浓