阿霉索性心力衰竭模型的氧化应激和凋亡机制＊.pdf

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysi01ogy20 !(8)：14—37-—1439 · 1437 · [文章编号】 1000—4718(21X)4)08—1437—03 阿霉索性心力衰竭模型的氧化应激和凋亡机制* 吴伟康 ， 杨 辉 ，赵明奇 (中山大学中山医学院病理生理学教研室，广东 广州 510089；广州医学院第一附属医院中医科，广东 广州 510120) [摘 要] 目的：观察阿霉素(ADR)复制慢性心力衰竭模型的心功能、氧化应激和心肌细胞凋亡发生情况。方 法：TBA法测定丙二醛(MDA)含量、邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶 (OSD)活性动态变化 ，TUNEL法检测细胞凋亡， 免疫组化检测P53蛋白含量，RT—PCR法检测p53mRNA表达。结果：ADR引起大鼠心功能显著降低的同时MDA含 量显著增加，SOD活性显著下降，心肌细胞发生凋亡，心肌组织 mRNA表达增加，P53蛋白合成明显增多。结论： 阿霉索性心力衰竭模型有显著的氧化应激反应和细胞凋亡发生， 基因在其凋亡发生机制中有一定作用。而且阿 霉索性心力衰竭中心肌细胞凋亡的发生与氧化应激有密切关系。 [关键词】 多柔比星；心力衰竭；应激；细胞凋亡；基因，P53；蛋白质153 [中图分类号] R363 [文献标识码] A 利用盐酸阿霉素复制慢性心力衰竭的动物模型 理记录仪(日本产ZS一6000型)；电动呼吸机(上海医 已被公认 ，该模型血液动力学表现与心肌炎、某些心 疗器械四厂产 Sc一2型)，电磁血流量计 (Progene公 肌病等所致的心力衰竭类似，适合研究衰竭心肌血 司)。 流动力学的变化…。p53是凋亡家族一个重要的基 2 手术方法 因，它是心肌细胞凋亡的激活因子之一。 目前阿霉 动物饲养 1周后，随机分组：心力衰竭组 以阿霉 素性心力衰竭发生机制尚不完全清楚，本实验从氧 素4mg／kg剂量尾静脉注射，1次／5d，共 3次，在 3 化应激 一细胞凋亡角度对其作初步探讨 。以期评价 次注射完后按不同的时点分为 2h、1周、2周、3周 4 该模型与人类疾病的相似性 。为该模型用于心力衰 组，每组 凡=8，对照组以相同方法注射等体积生理 竭发病机制及实验性治疗提供新的依据。 盐水，凡=8。用 3％戊巴比妥钠溶液 (1mL／kg，ip)将 大鼠麻醉，仰卧固定，颈部切开，分离气管及右侧颈 材 料 和 方 法 总动脉，右侧颈总动脉切开后插入直径 1lain已充满 1 实验材料 肝素的心导管，经压力转换器接四道生理记录仪，缓 SD大鼠，体重 180—220g，雄性，中山大学中山 慢推进 同时观察示波器 ，当导管进入左心室后停止 医学院实验动物中心提供。盐酸阿霉素(深圳万乐 推进，稳定2min后记录 ±dp／dtm~,(定标灵敏度 100 药业有限公司生产 ，批号 922001)；细胞凋亡检测试 mmHg／10mm，纸速 50~n／s)。待上述指标完成后， 剂盒、SABC免疫组化染色试剂盒购于武汉博士德生 缓慢抽出心导管，行气管切开，连接 电动呼吸机辅助 物工程有限公司；RNA提取试剂盒购于上海生物工 呼吸(潮气量 600—650mL／min，呼吸频率 32次／min， 程研究所；RT—PCR试剂盒及核酸分子量参照物 呼吸比1：1．5)；稳定数分钟后，沿右侧锁骨中线垂直 (marker)购于华美公司；琼脂糖为汕头达濠公司进 口 开胸 ，暴露心脏 ，分离主动脉根部，安置 内径 2mlTl的 分装。PCR扩增仪为美国Perkinelmer公司产品；计 电磁流量计探头，测量心输 出量。实验完毕后取心 算机凝胶成像仪为Progene公司产品；Konl~on图像分 脏备用。 析仪为德国mAS公司产品。p53引物是根据美国引 3 观察指标 物设计软件 ，利用 鼠GenBaIll【设计 ，由上海生物工程 3．1 症状及体征 观察呼吸、饮食、皮毛、腹水以及 研究所合成。p53引物序列为：P1：5一