新型原代细胞转染试剂.PDFVIP

新型原代细胞转染试剂新型原代细胞转染试剂 新型原代细胞转染试剂新型原代细胞转染试剂 ———— 默克默克Novagen纳米新材料转染试剂纳米新材料转染试剂NanoJuice™使用效果报告使用效果报告 ———— 默克默克 纳米新材料转染试剂纳米新材料转染试剂 使用效果报告使用效果报告 简介简介 简介简介 人们尝试过很多方法将质粒DNA导入细胞，常用的有DEAE右旋糖苷，磷酸钙沉淀，脂质体，显 微注射和电击等物理方法。现有的转染技术都或多或少的有各种不足，其中转染效率低，细胞毒 性高是研究者最常遇到的困扰；而许多细胞系，特别是原代细胞是很难获得理想的转染效果的。 现有的转染试剂产品在应用中还有一个普遍的问题，就是不太可能采用单一一种试剂在各种细胞 上都获得较高转染效率；因此研究者不得不尝试很多种类的转染试剂而获得特定细胞的最佳转染 效果。如果某种转染试剂盒可以在各种细胞——包括哪些 “抗拒转染”的细胞——的转染实验中 都能获得好结果，对于广大研究者来说将是一个福音。为了达到研究者的这种期望，默克 Novagen经验丰富的研究团队开发了NanoJuice™转染试剂盒，其两种组分互相促进，可以提高 各种哺乳动物细胞的转染效果。采用最新的纳米科学技术 ® Priostar dendrimers （树枝状聚合 物） 和多价阳离子脂质体的特别设计，NanoJuice转染试剂混合物可以确保获得卓越的转染效 率而细胞毒性极低。这种新的转染方法会帮助研究者在原代细胞和那些 “顽固抵抗转染”的细胞 上轻易获得成功。NanoJuice试剂盒中的两种试剂经过调节配比，很方便为不同的细胞设定最佳 转染效果的使用方法。有了NanoJuice转染试剂盒就再也不需要不断地为每一种细胞从头摸索不 同转染方法或尝试各种产品了。我们建议您采用预试验为特定的细胞找到最佳试剂用量，通常这 个小试可以在24孔板中进行；一旦最优化的转染试剂用量确定了，后续的操作可以在此基础上 非常方便地用等比缩放来轻松获得稳定的高效转染。 确定确定最佳转染条件预实验最佳转染条件预实验 确定确定最佳转染条件预实验最佳转染条件预实验 我们在一些原代细胞和其它较难转染的细胞上做了预试验，以便摸索试剂的最佳用量和配比。每 个试验设定6种条件，包括每ug DNA采用2种不同用量的NanoJuice核心转染试剂和4种不同用量 的转染增强试剂 （图1）。通常，NanoJuice的最适使用量范围是：核心转染试剂1-2ul / ug DNA， 转染增强试剂1-4ul / ug DNA。预试验结果显示，每种细胞的最佳转染效果采用的两种转 染试剂成分的比例可能差别甚大 （图2 ）。我们的尝试表明每一种细胞均需设置预试验以获得最 优化的实验条件，同时这些数据也证明了NanoJuice™转染试剂盒是一种多功能转染工具，可以 作为各种细胞高效转染的首选。不断在各种细胞上尝试NanoJuice转染试剂盒发现其两种试剂成 分的用量可以根据不同细胞的实际情况有更大幅度的调整。例如：Caco-2细胞的预试验中， NanoJuice核心转染试剂和转染增强试剂都是1ul / ug DNA。而进一步的尝试发现两种试剂的用 量可以更低一些，分别为1ul和0.75ul，而转染效率有小幅提高 （图3 ）。 图图1 确定确定最佳转染条件最佳转染条件的预实验的预实验，尝试，尝试88 图图 确定确定最佳转染条件最佳转染条件的预实验的预实验，，尝试尝试88 种转染核心种转染核心试剂与转染增强试剂与转染增强试剂的不同试剂的不同 种转染核心种转染核心试剂与转染增强试剂与转染增强试剂的不同试剂的不同 配比配比，每种做，每种做3个重复3个重复。。