PRRSV和PCV一2二重PCR检测方法的.PDFVIP

PRRSV和 PCV一2二重 PCR检测方法的 建立及初步应用 王 林 ，吴发兴 ，吴美芹。，高许雷 ，李 平 ，朱紫祥 。，张燕霞 ，张 志 ，李晓成 ，单 虎 卜 (1．青 岛农业大学，山东青 岛 266109；2．中国动物卫生与流行病学 中心，山东青 岛 266032；3．招远市畜牧局，山东烟 台 265400； 4．新疆农业大学，新疆乌鲁木齐 830052；5．西北农林科技大学，陕西杨陵 712100) 摘 要：参考GenBank上 已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒 2型0RF1 基因序列，分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪 圆环病毒 2型的2对引物 ，扩增 目的 片段大小分别为 421bp和 714bp。在建立 了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪 圆环病毒 2型的单项 PCR检测方法并优化单项PCR条件的基础上 ，建立 了针对两种病毒 的二重 PCR检测方法。通过检测 143 份临床病料对二重 PCR方法和单项 PCR／RT—PCR方法进行 了对比验证。结果显示，两者的总符合率在 92．6 以上 ，表 明该二重 PCR检测方法可以用于临床病料的检测。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ；猪 圆环病毒 2型 ；二重PCR 中图分类号 ：$852．659．6；$852．659．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5O38(2O1O)O6—0001—05 猪繁殖与呼吸综合征 (Porcinereproductiveand 计要求设计各 自PCR引物，在优化单项 PCR检测 respiratorysyndrone，PRRS)，俗称 “猪蓝耳病”，是 方法的基础上，初步建立了敏感的二重 PCR检测方 由猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcinereproductive 法 ，为预防和控制这两种疾病提供快速诊断方法 。 andrespiratorysyndronevirus，PRRSV)引起 的一 1 材料与方法 种急性传染病，主要引起妊娠母猪繁殖障碍和仔猪 1．1 材料 的呼吸道疾病n≈]。猪圆环病毒 (Porcinecircovirus， 1．1．1 细胞毒参考毒株 PRRSV、PCV一2、猪伪狂 PCV)是迄今发现 的一种最小 的动物病毒 ，具有 犬病病毒 (PRV)、猪瘟病毒 (CSFV)、猪细小病毒 PCV一1和PCV一2两种血清 型 。PCV一1无致病性 ，但 (PPV)、猪流感病毒 (SIV)细胞毒参考毒株均 由中 广泛存在于猪体内及猪源传代细胞系。猪圆环病毒 国动物卫生与流行病学中心监测室提供。 2型 (Porcinecircovirustype2，PCV-2)具有致病性， 1．1．2 组织病料 的来源及 处理 临床组织病料是 可引起猪体质下降、消瘦 、腹泻 ，还可表现 出生长发 2009年秋季 ，采集于河北省和安徽省不 同类型 的发 育不 良、皮肤苍 白、肌 肉衰弱无力 ，甚至 出现贫血、黄 病猪场或养殖户的疑似发病猪以及屠宰场。无菌操 疸等症状[3]。 作剪取 1．0g～2．0g病料，加少量灭菌 PBS(含青霉 两种病毒在临床上常呈混合感染 ，都可 引起早 产、流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍[4]。 目 素 、链霉素)，剪碎 ，用无菌研磨器研磨至糊状 ，再用 前 ，可用血清学方法或病毒分离鉴定对这两种病原 PBS按 1：4的体积 比稀释成悬液 ，样品经处理后分 的感染进行诊断[6]，但是耗时长，灵敏度低 ，不 能满 管置一7O℃冻存备用